半岛bd体育手机客户端 说明
一般描述
Pwo DNA 聚合酶是一种高度进行性耐热 5′-3′DNA 聚合酶并拥有一个 3′–5′核酸外切酶活性，又称校对活性。该酶无可检出的 5′–3′核酸外切酶活性。与 Taq DNA 聚合酶在此温度下半衰期小于 5 min 相比，Pwo DNA 聚合酶在 + 100℃ 下具有更高的热稳定性，半衰期超过 2 小时。Pwo DNA 聚合酶产生的 PCR 产物是平端的，因此可以直接用于平端连接，无需对末端进行任何预处理。
应用
特点和优势
包装
1 个试剂盒包含 4 种组份
质量
测定每批 Pwo DNA 聚合酶：
单位定义
一个单位 Pwo DNA 聚合酶定义为在 + 70℃ 和下述条件下 30 min 内催化 10 nmol 总脱氧核苷三磷酸掺入酸可沉淀 DNA 的酶量。
单位分析：活化 DNA 分析用孵育缓冲液
20 mM Tris-HCl，pH 8.8 (20℃)，50 mM KCl，2.5 mM MgCl2，10 mM 2-巯基乙醇，0.2 mM 各 dATP，dCTP，dGTP，dTTP。
孵育程序
12.5 mg 活化小牛胸腺 DNA 和 0.1 mCi [α-32P] dCTP 与 0.01～0.1 UPwo DNA 聚合酶在 50μl 含石蜡油的孵育缓冲液，+ 70℃，30 min。通过三氯乙酸沉淀，然后闪烁计数，测定掺入的 dNTP 的量。
体积活度：5 U/μl
制备说明
Pwo DNA 聚合酶最初是从超嗜热的古细菌——沃氏火球杆菌中分离得到的。
修饰核苷酸是底物
Pwo DNA 聚合酶接受修饰核苷酸，如地高辛-dUTP、生物素-dUTP 或荧光素-dUTP。因此，它可以在 PCR 过程中将这些核苷酸添加到 DNA 中。这些非放射性标记的产物可在许多应用中用作杂交探针。
镁浓度
如果使用随酶提供的含镁反应缓冲液，PCR 中的最终 MgCl2 浓度将为 2.0 mM。对于其他镁浓度(例如，为优化反应以适应特定模板)，使用无镁反应缓冲液并加入适量镁贮备液。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
法律信息
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基本信息
| 酶学委员会(EC)编号 | 2.7.7.7 ( BRENDA | IUBMB ) |
半岛bd体育手机客户端 性质
| 用途 | sufficient for ≤200 reactions (11644955001) sufficient for 200 reactions sufficient for ≤40 reactions (11644947001) sufficient for 40 reactions |
| 质量水平 | 100 |
| 特点 | High Fidelity PCR dNTPs included: no hotstart: no |
| 包装 | pkg of 100 U (11644947001) pkg of 500 U (11644955001 [2 x 250 U]) |
| manufacturer/tradename | Roche |
| technique(s) | PCR: suitable |
| input | purified DNA |
| 运输 | dry ice |
| 储存温度 | ?20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
| 货号 | 组份 |
| Enzyme is supplied in storage and dilution buffer | |
| PCR buffer, with 20 mM MgSO410x concentrated | |
| PCR buffer, without MgSO410x concentrated | |
| MgSO4stock solution |
安全信息
| 危险声明 | H412 |
| 预防措施声明 | P273 - P501 |
| 危险分类 | Aquatic Chronic 3 |
| 储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
| WGK | WGK 2 |
| 闪点(F) | does not flash |
| 闪点(C) | does not flash |
Sigma-Aldrich
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