半岛bd体育手机客户端 说明
一般描述
通过切口平移法对DNA进行放射性或非放射性标记的试剂盒。该方法利用DNA酶和DNA聚合酶的组合来切割DNA螺旋的一条链,然后在聚合酶检查或“校对”切口位点时掺入标记的核苷酸。
特异性
热灭活:通过加入1 μl 0.5MEDTA(pH8.0)和/或加热至65℃10分钟来终止反应。
应用
该试剂盒可用于经放射性或修饰的dNTP标记的DNA。通过切口平移标记的探针可用于许多不同的杂交技术中。其包括将探针用于:
包装
1个试剂盒包含7种组分。
半岛bd体育手机客户端 规格
测定时间:45分钟
比活度:特异性标记的水平和掺入率取决于底物DNA与标记的脱氧核糖核苷三磷酸的比例,例如,在含有0.1 μgDNA和20 μCidXTP或0.5 μgDNA和100 μCidXTP的测定中,所获得的动力学和标记水平是相同的。
标准测定可获得3×108dpm/ μg的比活性,相当于在35分钟内,不同底物DNA(例如,pBR322、λDNA、DNA片段)的掺入比率达到65%。
样品材料
原理
切口平移法是基于DNase I在Mg2+存在下以低酶浓度将随机分布的切口引入DNA的能力来实现的。大肠杆菌DNA聚合酶I使用切口的3′-OH末端作为引物,以5′→3′方向合成与完整链互补的DNA。DNA聚合酶I的5′→3′核酸外切活性可同时去除合成方向上的核苷酸。聚合酶活性可依次利用同位素标记的或半抗原标记的脱氧核糖核苷三磷酸对去除的核苷酸进行替换。在低温(+15℃)下,反应中未标记的DNA因此被新合成的标记DNA所取代。
制备说明
工作浓度:T7、T3或SP6 RNA聚合酶的推荐工作浓度为1 mM。
工作溶液:DNA
DNA必须在低盐浓度溶液中工作。
dATP,dGTP,dTTP
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
半岛bd体育手机客户端 性质
质量水平 | 100 |
用途 | sufficient for 50 labeling reactions |
包装 | kit of 1 (7 components) |
manufacturer/tradename | Roche |
technique(s) | FISH: suitable |
运输 | dry ice |
储存温度 | ?20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
货号 | 组份 |
Control DNA pBR322, 20 μl 50 ?g/ml | |
dATP, 50 μl 0.4 mM | |
dCTP, 50 μl 0.4 mM | |
dGTP, 50 μl 0.4 mM | |
dTTP, 50 μl 0.4 mM | |
Nick Translation Buffer, 100 μl 10x concentrated | |
Enzyme Mixture, 100 μl, DNA Polymerase I and DNase I in 50% glycerol (v/v) |
安全信息
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | does not flash |
闪点(C) | does not flash |