半岛bd体育手机客户端 说明

一般描述

使用随机寡核苷酸作为引物，用修饰的脱氧核苷三磷酸对 DNA 进行放射性和非放射性标记的便捷试剂盒。该方法通过 Klenow 聚合酶用 3′-作为引物的随机寡核苷酸的 OH 末端。
样品材料

• 线性或超螺旋质粒 DNA，λ脱氧核糖核酸
• 200 bp 较短片段
• 熔融琼脂糖中的 DNA 片段
• 10 ng DNA

检测时间：标准标记检测 20 min

注：待标记 DNA 的长度不影响反应。孵育 30-60 min 后达到最大掺入。

特异性

标准品试验通常得到的比活度为 2 x 10⁹dpm/μg，孵育 10 min 后使用不同的底物 DNA。
热灭活：通过加入2μl 0.2MEDTA (pH 8.0) 和/或加热至 65℃ 10 分钟来停止反应。

应用

根据高引物(High Prime)原理，高引物DNA标记试剂盒可用于快速的随机引物DNA标记。该方法能够标记仅微量的DNA，例如，从凝胶或融化琼脂糖中分离的DNA限制性片段。单独提供的核苷酸溶液为改性脱氧核糖核苷三磷酸酯(例如，³²P、³⁵S、³H、异羟基洋地黄毒苷元、荧光素、生物素或罗丹明)提供了一种选择。高引物DNA标记试剂盒已被用于：

• 高引物标记探针用于多种杂交技术：Southern 印迹
• Northern 印迹
• 基因文库筛选
• 原位杂交
• 消减杂交 (SSH) 试验

High Prime DNA 标记试剂盒提供与 High Prime 相同的特性。

包装

1 个试剂盒包含 6 种组分。

原理

Feinberg 和 Vogelstein 最初开发的“随机引物”DNA 标记方法是基于所有可能序列的寡核苷酸与待标记的变性 DNA 杂交。Input DNA 是合成标记 DNA 的唯一模板，使使用这种方法标记微量 DNA (10 ng) 成为可能。模板使用 Klenow 聚合酶在 3′ 端合成互补 DNA 链-用作引物的随机寡核苷酸的 OH 末端。修饰的脱氧核苷三磷酸(例如，用³²P、³⁵S、³H、地高辛、生物素、荧光素或罗丹明标记)加入到反应中很容易掺入到新合成的 DNA 链中。

制备说明

工作液：dATP，dGTP，dTTP 混合物：
一个标记反应移液器：
1μl dATP，(瓶 2)
1μl dGTP，(小瓶 4)
1μl dTTP，(瓶 5)
至反应瓶中。

注：如果重复使用同类型标记的脱氧核苷三磷酸，为方便起见，我们建议制备其他三种脱氧核苷三磷酸等量的混合物。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

半岛bd体育手机客户端 性质

用途	sufficient for 50 labeling reactions (0.01 to 2 μg DNA per assay)
质量水平	100
manufacturer/tradename	Roche
运输	dry ice
储存温度	?20℃

组份列表

组份不可单独销售

货号	组份
	High Prime Reaction Mixture (random primer mixture, Klenow polymerase, labeling grade, and 5x stabilized reaction buffer in 50% (v/v) glycerol) 5x concentrated
	dATP: 2′-Deoxyadenosine-5′-triphosphate in Tris buffer 0.5 mM
	dCTP: 2′-Deoxycytidine-5′-triphosphate in Tris buffer 0.5 mM
	dGTP: 2′-Deoxyguanosine-5′-triphosphate in Tris buffer 0.5 mM
	dTTP: 2′-Deoxy-thymidine-5′-triphosphate in Tris buffer 0.5 mM
	Control DNA: λDNA 12.5 μg/ml

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	WGK 1
闪点(F)	does not flash
闪点(C)	does not flash