半岛bd体育手机客户端 说明

一般描述

方便的寡核苷酸混合物，用于放射性、地高辛或生物素标记的核苷酸快速随机引物标记 DNA。Klenow 聚合酶合成互补 DNA 链-作为引物的随机寡核苷酸的 OH 末端。

特异性

热灭活：通过加入2μl 0.2MEDTA (pH 8.0) 和/或加热至 65℃ 10 分钟来停止反应。

应用

Hexanucleotide Mix 是所有可能序列的六聚体核苷酸混合物，用于随机引物 DNA 标记。
高比活性的 DNA 标记探针用于多种杂交技术：

• 基因文库的筛选
• Southern 和 northern 印迹
• 原位杂交
• RT-PCR
• cDNA文库的生成
• 第一链cDNA的合成
• 载体滴度测定中
• 第二链合成

特点和优势

本品为 10x 浓度的随机己酸核苷酸混合物。从统计学上看，混合物可能含有多达 4096 种不同的己酸核苷酸，但这些核苷酸的含量可能不同。

内容物
反应缓冲液中的环己核苷酸(62.5 A₂₆₀单位/ml)的 10x 浓缩混合物[0.5M Tris-HCl，0.1M MgCl₂，1 mM 二硫赤藓糖醇 (DTE)，2 mg/mL BSA，pH 7.2 (+ 20 ℃)]
注：混合物与 DIG DNA 标记和检测试剂盒的小瓶 5 和 DIG DNA 标记试剂盒的小瓶 5 以及随机引物 DNA 标记试剂盒的小瓶 6 中提供的完全相同。

质量

在随机引物 DNA 标记试剂盒中检测的功能。

原理

Feinberg 和 Vogelstein 开发的“随机引物”DNA 标记方法是基于所有可能的己核苷酸与待标记 DNA 的混合物进行杂交。所有序列组合在六核苷酸引物混合物中表示，这导致引物以统计方式与模板 DNA 结合。因此，保证沿模板 DNA 全长的标记程度相等。互补链采用 Klenow 酶，标记级，从随机六核苷酸引物的 3'-OH 末端合成。反应中存在的修饰脱氧核苷三磷酸([³²P]、[³⁵S]、[³H] 或 [¹²⁵I] 地高辛或生物素标记)掺入新合成的互补 DNA 链。

制备说明

检测时间
标记(放射性)：50 min
地高辛-11-dUTP 标记试验：80 min

样品材料

• DNA 片段
• 线性化质粒 DNA
• λDNA

注：待标记 DNA 片段的长度不影响反应。100 bp 长度的 DNA 片段与线性化质粒或 λ 同样标记-DNA。输入的 DNA 仅用作合成标记 DNA 的模板，并且在反应期间不被降解，使得使用该方法标记极少量的 DNA (10 ng) 成为可能。

合成：所有 4 个碱基均用于合成该随机六核苷酸混合物。在最初的反应中，起始核苷酸连接到固相载体。在随后的偶联反应中，等摩尔量的 4 dNTP 与起始核苷酸连接，直到生成六聚体。然后从固相载体中释放六聚体。
寡核苷酸经 HPLC 纯化、脱盐和 5′-磷酸化。

分析说明

吸收：62.5 A₂₆₀单位相当于 2.5 mg/mL 己酸核苷酸。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

半岛bd体育手机客户端 性质

形式	solution
质量水平	100
用途	sufficient for 50 labeling reactions
包装	pkg of 100 μL
manufacturer/tradename	Roche
technique(s)	Northern blotting: suitable Southern blotting: suitable cDNA synthesis: suitable (first strand) hybridization: suitable
运输	dry ice
储存温度	?20℃

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	WGK 1
闪点(F)	No data available
闪点(C)	No data available