Dpn I

半岛bd体育手机客户端 说明

一般描述

Dpn I需要腺嘌呤残基甲基化才能发挥活性，因此只能消化包含N6-甲基腺嘌呤的G^mATC序列。这样的甲基化序列是由dam甲基化酶产生的。甲基化的这种要求将Dpn I与Mbo I和Sau3A I区分开来，其中Mbo I的活性会被dam甲基化所抑制，Sau3A I不会受到甲基化的影响。并且，Dpn I在识别序列上的切割位点也与Mbo I和Sau3A I不同。
同裂酶
该酶是Bsp143 I、Dpn II、Mbo I、Nde II和Sau3A I的同裂酶。
甲基化敏感性
如果不存在6-甲基腺嘌呤，该酶仅在指定位点(*)处出现5-甲基胞嘧啶时发生抑制。
典型的连接和再切割检测
将通过完全消化1μg pBR322 DNA所获得的Dpn I片段在+4℃下与1U T4 DNA连接酶在10μl含有66mM Tris-HCl、5mM MgCl₂、5mM二硫苏糖醇、1mM ATP、pH 7.5(在+ 20℃时)的缓冲液中连接16小时。可连接并随后用Dpn I重新切割的产物的百分比(产生pBR322×Dpn I片段的典型模式)已在分析证书的“Lig”和“Rec”下列出。

特异性

识别位点：GmAT * C
G^mAT * C
限制性切割位点：GmA↓T*C
G^mA↓T*C
热灭活：在65℃孵育15分钟后Dpn I未失活。

应用

在PCR介导突变中，DpnI核酸酶已被用于PCR后的野生型DNA的消化。

质量

缺乏非特异性内切核酸酶活性
将1μg pBR322 DNA 与过量的Dpn I一起在50 μl SuRE/Cut 缓冲液H中孵育16小时。分析证书提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。
缺乏核酸外切酶活性
将大约5 μg [³H]标记的小牛胸腺DNA与3 μl Dpn I一起溶于总体积为100 μl的50mM Tris-HCl溶液(含10 mM MgCl₂、1mM二硫赤藓糖醇，pH约7.5)中,并在+ 37℃下孵育4小时。根据分析证书所述，在这些条件下，检测不到放射性释放。

相容性

Dpn I可生成具有与任何钝端相容的钝端片段。

DNA图谱分析

不同DNA上的切割位点数

• λ: 116
• φX174: 0
• Ad2: 87
• M13mp7: 8
• pBR322: 22
• pBR328: 27
• pUC18: 15
• SV40: 8

单位定义

在+37℃，总体积为25 μl的(1x)SuRE/切割缓冲液A中，一个单位表示在1个小时内裂解1μg pBR322 DNA的酶活性。由于pBR322 DNA的完全Dpn I消化需要完全甲基化的GATC序列，因此在活性测定过程中可能会观察到< 5%的部分消化条带。

分析说明

在PCR缓冲液中的活性：100％

在PCR混合液(Taq DNA聚合酶缓冲液)中的相对活性为100％。PCR混合液含有λDNA、引物、10mM Tris-HCl(pH 8.3，20℃)、50mM KCl、1.5mM MgCl₂、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNA聚合酶。该混合液可用于25个扩增循环。在Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合液的反应缓冲液中的活性为100％。Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合液不在美国出售。
SuRE/Cut 缓冲液系统
推荐使用加粗缓冲液以获得最佳活性

• A:100%
• B:75-100%
• H:75-100%
• L:50-75%
• M:75100%

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

半岛bd体育手机客户端 性质

质量水平	100
生物来源	bacterial (Diplococcus pneumoniae)
形式	solution
包装	pkg of 1,000 U (10742988001 [10 U/μl]) pkg of 200 U (10742970001 [10 U/μl])
manufacturer/tradename	Roche
参数	37 ℃ optimum reaction temp.
运输	dry ice
储存温度	?20℃

组份列表

组份不可单独销售

货号	组份
	Enzyme Solution
	SuRE/Cut Buffer A 10x concentrated

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	WGK 1
闪点(F)	does not flash
闪点(C)	does not flash