半岛bd体育手机客户端 说明

一般描述

SUMO蛋白酶是一类通用的酶，其特异性去除翻译后蛋白修饰(PTM)——所谓的小泛素相关修饰物(SUMO)，属于泛素和/或泛素样蛋白(UBL)的翻译后蛋白修饰类。通常称为“SUMO蛋白酶”的酶是来自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的泛素样特异性蛋白酶1(Ulp1)。这是这类酶中第一个被分离出来的。SUMO蛋白酶以“无痕”方式特异性切割SUMO部分。SUMO蛋白酶识别泛素样SUMO结构域的三级结构，并在SUMO结构域的C末端，水解x-Gly-Gly-x序列中Gly-Gly键后的肽键。除了切割天然SUMO修饰的蛋白质外，SUMO蛋白酶还用于切割重组SUMO融合蛋白。SUMO结构域是已经的溶解度增强融合标签，用于重组蛋白表达组氨酸标签也可以作为纯化标签添加到SUMO结构域的N末端。该 SUMO蛋白酶产物携带 6x 组氨酸标签。因此，在消化反应之后，它可以与裂解的SUMO结构域一起容易地去除
SUMO蛋白酶在很宽的温度范围(2-30℃)，离子强度范围(0-400 mM NaCl)和pH 范围(6-8.5)内都有活性。然而，其活性可能因底物和条件而变化。研究人员需要优化其特定的反应条件。作为初步建议，每 mg 靶蛋白可以使用20 单位的SUMO蛋白酶，在30℃ 下，1 小时，或在2-8℃ 下过夜。然后可以通过 SDS-PAGE 估计切割效率。如果需要，然后可以调整 SUMO蛋白酶的量。SUMO蛋白酶在还原剂存在下效果更好，例如0.5-2mM DTT。反应混合物中的DTT可显着提高切割效率，尤其是在较长时间的孵育期间
将重悬的产物储存在-20℃。 建议在100μL 水或 50％ 甘油(v/v)中重悬酶，并补充 1 mM DTT。水/DTT中的溶液应以冷冻等分试样储存，以避免冻融循环，这会对蛋白酶活性产生不利影响。

单位定义

在30℃ 下，一单位酶可在1小时内，切割 90％的100pmol SUMO-GST。

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