半岛bd体育手机客户端 说明
一般描述
溶组织梭菌含有两种胶原酶,可剪切胶原酶三螺旋不同的切割位点。切割效率比哺乳动物胶原酶更高。梭菌胶原酶与气性坏疽的细菌侵袭有关。
应用
胶原酶已被用于制备动脉组织,用于研究晚期糖基化终产物(AGE)。该酶还与其他蛋白酶一起用于人肿瘤、小鼠肾、人脑、肺上皮和许多其他组织的解聚。它在肝脏和肾脏灌注研究,胰腺消化和非实质肝细胞的分离中也是有效的。当测试该酶是否适合释放肝细胞时。对于每只大鼠肝脏,胶原酶以约 1mg/mL 使用,总体积为 100mL。
胶原酶(源于溶组织梭菌)用于解离组织样本,如脾脏和睾丸组织。
生化/生理作用
从组织中有效释放细胞需要胶原酶和中性蛋白酶的作用。胶原酶被每克摩尔酶 4 克原子钙(Ca2+)活化。培养滤液被认为含有至少 7 种不同的蛋白酶,分子量范围为 68-130 kDa(最适 pH 值:6.3-8.8)。该酶通常用于消化组织样品中的结缔组分以释放单个细胞。胶原酶治疗可导致一些细胞死亡。通常,用于消化的浓度为 0.1 至 5mg/mL。反应持续时间从 15 分钟到几小时不等,这使得能够有效地解离细胞而不会导致过多的细胞死亡。具有钙和 BSA 的 Krebs Ringer 缓冲液是优选的,并且 Zn2+是其活性所必需的。
每摩尔胶原蛋白酶被4g原子钙活化。 它被乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-N,NN′,N′-四乙酸,β-巯基乙醇、谷胱甘肽、巯基乙酸和8-羟基喹啉抑制。
注意
根据提供,该半岛bd体育手机客户端 在 -20℃ 下,可稳定保存一年。在 37℃、50℃ 和 -20℃ 下,30 天内 FALGPA 或蛋白酶活性没有损失。如果以等分试样(10mg/mL)快速冷冻,并且在 -20℃ 下冷冻,则粗胶原酶的溶液是稳定的。进一步的冻融循环会损坏溶液。 当在冰上保持时,该半岛bd体育手机客户端 在 7 小时内保持 100% 活性。
单位定义
一个胶原蛋白消化单元(CDU)从牛跟腱胶原蛋白中释放的肽链量和1.0 μ亮氨酸,5小时,pH7.4,37℃,在钙离子存在下的茚三酮颜色相同。一个 FALGPA水解单元每分钟,25℃,水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一个中性蛋白酶单元水解酪蛋白,产生颜色和1.0 μmole 酪氨酸每5小时,pH7.5,37℃下产生的相同。一个梭菌蛋白酶单元在DTT存在下,pH7.6,25℃,每分钟水解1.0 μmole BAEE。
制备说明
从 IV 型(C5138)制备。可以通过在 37℃ 下,将 0.05-0.1mg/mL 胶原酶溶解在含有 0.36mM 氯化钙(TESCA)(pH 7.4)的 50mM TES 缓冲液中来制备储备溶液。该半岛bd体育手机客户端 还含有梭菌蛋白酶,非特异性中性蛋白酶和胰蛋白酶活性。
基本信息
酶学委员会(EC)编号 | 3.4.24.3 ( BRENDA | IUBMB ) |
EC 号 | 232-582-9 |
MDL编号 | MFCD00130830 |
NACRES | NA.54 |
半岛bd体育手机客户端 性质
质量水平 | 200 |
无菌性 | 0.2 μm filtered |
形式 | powder |
specific activity | ≥125 CDU/mg solid 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid |
分子量 | 68-130 kDa |
适用性 | release of physiologically active rat hepatocytes tested |
application(s) | diagnostic assay manufacturing |
储存温度 | ?20℃ |
安全信息
象形图 | |
警示用语: | Danger |
危险声明 | H334 |
预防措施声明 | P261 - P284 - P501 |
危险分类 | Resp. Sens. 1 |
储存分类代码 | 11 - Combustible Solids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | Not applicable |
闪点(C) | Not applicable |
个人防护装备 | dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves |
Sigma-Aldrich