半岛bd体育手机客户端 说明
一般描述
利用该系统能够获得均匀标记的单链RNA。转录物可以用生物素或DIG-11-UTP标记,或者使用[α-32P]或[α-35S]标记的核苷酸进行放射性标记,以获得高比活性。
内容物:
特异性
启动子特异性
SP6 RNA聚合酶具有极强的启动子特异性,仅转录噬菌体SP6 DNA或SP6启动子下游的克隆DNA(例如pSPTBM20;pSPTBM21)。
热灭活:通过加入 2 μl 0.2 M EDTA(pH 8.0)和/或加热至65℃来终止反应。
应用
SP6 RNA聚合酶能够以转录SP6启动子下游的克隆DNA为模板,转录合成相应的RNA。可以用标记的NTP进行合成,获得高度标记的RNA。合成的RNA可用于许多应用,包括:
质量
测试缓冲液
40 mM Tris-HCl,pH 8.0 (+20℃),6 mM MgCl2,10 mM二硫苏糖醇,2 mM亚精胺,pH约为8.0 (+20℃).
无核酸内切酶
1.将1 μgλDNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液,在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无λDNA降解。
2.将1 μg λDNA的Eco RI/Hind III片段与SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液,在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表带型无变化。
无切割活性
将1 μg pBR322 DNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液,在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无超螺旋结构解旋。
无RNA酶
将4 μg MS2 RNA和SP6 RNA聚合酶溶于50μl测试缓冲液,在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无MS2 RNA降解。
在转录分析中的性能
使用SP6/T7转录试剂盒(目录号10 999 644 001)对SP6 RNA聚合酶进行功能测试。使用0.5 μg pST18 neo DNA进行标准检测,用Eco RI酶切并使用50 mCi [alpha-32P] CTP, [400 Ci/mmol (15 TBq/mmol)]标记,20分钟内的掺入率给出>50%的输入放射性。
半岛bd体育手机客户端 规格
杂交探针的合成:SP6 RNA聚合酶能够高效生产均匀标记的RNA。这种标记RNA可用作Southern、Northern和斑点印迹以及原位杂交的杂交探针。
合适的标记物:转录物可以用生物素-16-UTP、DIG-11-UTP或荧光素-12-UTP进行非放射性标记。还可以用 [a-32P]- 或[a-35S]-标记的核苷酸进行放射性标记,以获得高比活性。
注意:罗氏拥有10倍浓缩的RNA标记混合物,专为DIG-、生物素和荧光素标记而设计。这些混合物与SP6 RNA聚合酶配合良好。
单位定义
一个酶活性单位是在+37℃下,在60分钟内向酸可沉淀的RNA产物中掺入1 nmol CMP所需的酶活性。
体积活性:≥20 U/μl
制备说明
活化剂:BSA/精胺
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
半岛bd体育手机客户端 性质
质量水平 | 100 |
形式 | solution |
包装 | pkg of 1,000 U (10810274001) pkg of 5,000 U (11487671001) |
manufacturer/tradename | Roche |
运输 | dry ice |
储存温度 | ?20℃ |
组份列表
组份不可单独销售
货号 | 组份 |
SP6 RNA Polymerase, in buffer, pH 7.9 ≥20 U/μl | |
Transcription Buffer 10x concentrated |
安全信息
象形图 | |
警示用语: | Warning |
危险声明 | H319 |
预防措施声明 | P264 - P280 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313 |
危险分类 | Eye Irrit. 2 |
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 1 |
闪点(F) | does not flash |
闪点(C) | does not flash |
Sigma-Aldrich