半岛bd体育手机客户端 说明

一般描述

Cas9表达质粒使用CMV启动子，以实现Cas9的强瞬时表达。可以使用MluI和NheI替换CMV来进行启动子替换。此外，Cas9表达质粒可以使用XbaI进行线性化，从而用于基于T7的mRNA生成。添加与Cas9核酸酶平移共表达的荧光团可以容易地实现成功转染的可视化。

应用

CMV-CAS9-2A-GFP 质粒已被用于诱导人类U937白血病细胞中的额外性梳样1( sex combs-like1 )突变。它也已用于CRISPR/Cas9分析。
CMV-CAS9-2A-GFP质粒适用于以下功能基因组学/靶点验证：

• 在多种细胞系中创建基因敲除
• 完全敲除不适合RNAi的基因
• 通过整合到内源基因中的启动子、融合标签或报告基因创造基因敲入细胞系

组分

1管含1μg 的Cas9-2A-GFP质粒。
请注意，该半岛bd体育手机客户端 不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR半岛bd体育手机客户端 选项卡单独购买。

原理

CRISPR/Cas被细菌和古细菌用作防御入侵病毒和质粒的防御系统。最近，来源于化脓性链球菌 的II型CRISPR/Cas系统已被设计为在真核系统中起作用，其使用两种分子组分：单一Cas9蛋白和非编码向导RNA(gRNA)。可以通过单个gRNA对Cas9内切核酸酶进行编程，从而将DNA双链断裂(DSB)导向所需的基因组位置。与由锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB类似，细胞随后激活内源DNA修复过程[非同源末端连接(NHEJ)或同源定向修复(HDR)]，以愈合目标DSB。

其他说明

为了介导DNA双链断裂，必须与U6-gRNA质粒一起使用。
文献中使用的标准转染浓度范围为≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9质粒结合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA质粒。(上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染)。

法律信息

CRISPR使用许可协议

基本信息

NACRES

NA.51

半岛bd体育手机客户端 性质

质量水平	200
重组	expressed inE. coli
包装	vial of 50 μL
浓度	20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)
启动子	Promoter name: CMV
报告基因	GFP
selection	kanamycin
运输	dry ice
储存温度	?20℃

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	nwg
闪点(F)	Not applicable
闪点(C)	Not applicable