半岛bd体育手机客户端 说明

一般描述

由布罗德研究所(Broad Institute)Feng Zhang实验室开发的人类GeCKO v2(双载体系统)文库，包含100,000多个独特的gRNA，用于人类基因组的基因敲除。利用lenti CRISPR双载体的混合文库将只会表达gRNA(利用lentiGuide-Puro载体)，与版本1相比，该系统可产生100倍以上的高滴度病毒。lentiGuide-Puro库仅能用于已整合了Cas9的细胞(单独使用enti-Cas9-Blast载体进行生成)。Sigma的向导RNA型慢病毒人类GeCKO库分装为8管，每管25 ul，最低滴度为5X10^8 TU/ml(由p24试验检测)。每个物种特异性的文库被作为2个1/2文库(A和B)进行交付。建议同时对A和B文库进行筛选，从而使每个基因对应6个sgRNA(每个文库提供3个sgRNA)。两个文库均含有1000个非靶标对照sgRNA。A文库也会靶向miRNA(每个miRNA对应4个sgRNA)。

应用

功能基因组学/筛选/靶标验证

特点和优势

• 使用CRISPR核酸酶敲除蛋白质编码基因，从而可对蛋白质功能进行评估
• 可在实验室中实现对人类全基因组(16,000多个基因)的有效筛选，无需机器人或特殊设备
• 大量内在的富集和缺失克隆，使研究人员对实现混合筛选实验结果更自信
• 慢病毒CRISPR可感染多种不同的哺乳细胞，它通过将单导向RNA转导至表达Cas9的人类细胞中，促进筛选应用中的基因敲除。
• 将人类GeCKO版本2文库的双载体系统用于已将Cas9整合到基因组中的人类细胞。
• 转导后，使用嘌呤霉素gRNA筛选。

制备说明

每mL的Puro Kill Curve和Determining CFU(克隆形成单位)。在进行文库规模的筛选前，必须进行2次预实验。请访问Sigma.com/pooledscreening。

其他说明

该半岛bd体育手机客户端 仅供研发使用，不可用作药物、家庭使用或其他用途。请查阅物质安全资料表，获取危险和安全操作规范信息。尽管生产的慢病毒转导颗粒是不可复制的，但仍然建议将其作为生物危害等级2级(RGL?2)生物体在实验室中进行处理。请遵循所有已发表的RGL-2指南，进行实验室废物处理和净化。

法律信息

CRISPR使用许可协议

慢病毒许可协议

基本信息

NACRES

NA.51

半岛bd体育手机客户端 性质

质量水平	200
包装	pkg of 8x25 μL (vials)
浓度	5x108VP/ml (via p24 assay)
application(s)	CRISPR
运输	dry ice
储存温度	?70℃

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	WGK 3
闪点(F)	Not applicable
闪点(C)	Not applicable