半岛bd体育手机客户端 说明

一般描述

Cas9表达质粒使用CMV启动子实现Cas9强瞬时表达。您可以使用MluI和NheI酶切将CMV替换为其它启动子。而且还可使用XbaI酶切将Cas9表达质粒线性化，以实现基于T7的mRNA表达。

应用

功能性基因组学/靶点验证

• 在多种细胞系中进行基因敲除
• 对不适合于RNAi的基因进行完全敲除
• 建立基因敲入细胞系，将启动子、融合标签或报告基因整合到内源性基因中

组分

1管含1?g 的Cas9质粒。
请注意，该半岛bd体育手机客户端 不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR半岛bd体育手机客户端 选项卡单独购买。

原理

CRISPR/Cas是细菌和古细菌的一种防御系统，可用来对抗入侵的病毒和质粒。来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统包含两种分子元件，即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA(gRNA)，该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9核酸内切酶可在单个gRNA的引导下，在指定基因组位置上引入DNA双链断裂(DSB)。与锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB相似，细胞随后会激活内源性DNA修复程序，即非同源性末端接合(NHEJ)或同源重组修复机制(HDR)，对目标DSB进行修复。

外形

Sigma Cas9 质粒DNA的半岛bd体育手机客户端 形式是浓度为20ng/μl的50μl溶液。

制备说明

Sigma CRISPR质粒半岛bd体育手机客户端 为小量提取包装，可能不适用于转染到特殊类型的细胞中。为得到最佳结果，我们建议在转染前使用无内毒素的DNA纯化试剂盒大量提取质粒。

其他说明

为了介导DNA双链断裂，必须与U6-gRNA质粒一起使用。
文献中使用的标准转染浓度范围为≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9质粒结合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA质粒。(上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染)

法律信息

CRISPR使用授权协议

基本信息

NACRES

NA.51

半岛bd体育手机客户端 性质

质量水平	200
重组	expressed inE. coli
包装	vial of 50 μL
浓度	20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)
启动子	Promoter name: CMV
selection	kanamycin
运输	dry ice
储存温度	?20℃

安全信息

储存分类代码	10 - Combustible liquids
闪点(F)	Not applicable
闪点(C)	Not applicable