紫云英根瘤菌复苏操作流程

1. 准备工作，开水浴锅，预热试剂，超净工作台紫外照射 30min,找到对应细胞在液氮罐中的位置。

2. 紫外照射后风机吹 10min 后，酒精擦拭台面，放入试剂和离心管，取 15ml 离心管，加入 9ml 培养液。

3. 在液氮罐中取出细胞，先拧松放液氮，再拧紧，将冻存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min。

4. 将冻存管喷酒精后放入超净台内，擦干管壁，用 1ml 头将细胞转移到已加培养液的离心管中。

5. 800-1000rpm 离心 5min,注意配平。

6. 将离心好的细胞弃上清，加入 5ml 完全培养基重悬，用移液管吹打 8-10 次， 避免产生气泡，将细胞悬液接种到 10cm 培养皿中，补加 5ml 培养液。

7. 混匀，十字法或者 8 字法。

8. 将混好的细胞放入培养箱中培养。

注意事项

1. 上述操作方案的数据可作为参考，实际操作已实验室配备的耗材为准，

2. 冻存时含 10%DMSO,事先加 9ml 培养液是为了稀释 DMSO，理论上 1%DMSO

对细胞性

3. 隔着 PE 手套能有效防止水浴过程中导致污染

4. 重悬的体积只是作为参考，具体的根据需要可进行调整

5. 由于复苏过程中已经离心，第二天可根据实际情况选择换液或者不换液（主要针对贴壁细胞）