半岛bd体育手机客户端 组分
P1071 |
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HSTMTaq DNA聚合酶 |
5 U/μl |
50 μl |
10×HSTM PCR缓冲液(Mg2+Plus) |
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1.4 ml |
6×上样缓冲液 |
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1 ml |
P1072 |
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HSTMTaq DNA聚合酶 |
5 U/μl |
100 μl |
10×HSTM PCR缓冲液(Mg2+Plus) |
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1.4 ml |
6×上样缓冲液 |
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1 ml |
P1073 |
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HSTMTaq DNA聚合酶 |
5 U/μl |
200 μl |
10×HSTM PCR缓冲液(Mg2+Plus) |
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1.4 ml×2 |
6×上样缓冲液 |
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1 ml |
P1074 |
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HSTMTaq DNA聚合酶 |
5 U/μl |
100 μl×18 |
6×上样缓冲液 |
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1 ml |
注:1、HSTMTaq DNA聚合酶分为2.5 U/μl与5 U/μl两种包装,可自由选择,如没特别说明提供5 U/μl的包装。
2、10×PCR 缓冲液分为Mg2+Plus与Mg2+Free两种包装,可方便选择。如没特别说明提供Mg2+Plus缓冲液。Mg2+Free的 10×PCR 缓冲液提供25 mM MgCl2。
3、电泳时,请按每5 μlPCR反应液中加入1μl的比例添加6×上样缓冲液 混合后进行电泳。
保存条件
-20℃保存2年。多次冻融不影响生物学活性。
半岛bd体育手机客户端 说明
HSTMTaq DNA聚合酶(High Specificity Taq DNA polymerase)是针对普通 Taq DNA聚合酶灵敏度高,易产生非特异性条带的情况,专门研制的高特异性嗜热DNA聚合酶半岛bd体育手机客户端 。本半岛bd体育手机客户端 的反应缓冲液的离子种类和浓度都经过改良,使得引物与模板的特异性结合力显著增强,从而提高引物与模板结合的严谨性,减少非特异性扩增。实验数据证明。 HSTMTaqDNA聚合酶能显著提高PCR扩增的特异性,降低背景,又能对长片段有较高的扩增效率。
半岛bd体育手机客户端 特点
热稳定性好:95℃下半衰期超过40 min。
PCR产物具有3'-dA,可直接用于T/A克隆。
扩增特异性高。
半岛bd体育手机客户端 用途
常规PCR扩增
DNA标记
DNA测序
制备TA克隆用PCR产物
活性定义
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,扩增活性无明显改变。
10×PCR缓冲液
500 mM KCl
100 mM Tris-Cl
15 mM MgCl2
1% Triton-100
酶贮存液
20mM Tris-HCl
1mM DTT
0.1mM EDTA
100mM KCl
50 % Glycerol
1% Triton-100
应用举例
注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。
以λDNA为模板,扩增1kb片段。
λ DNA(2.5 ng/μl) |
1 μl |
引物1 (10 μM) |
2 μl |
引物2 (10 μM) |
2 μl |
10×PCR 缓冲液 |
5 μl |
dNTP混合物(2.5 mM) |
4 μl |
HSTM Taq(5 U/μl) |
0.25 μl |
超纯水 |
补足至50 μl |
PCR反应条件
95℃ |
3 min |
95℃ |
30 sec |
55~68℃ |
30 sec 30 Cycles |
72℃ |
1 min |
72℃ |
10 min |
注意事项
1、HSTMTaq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。
2、碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。HSTMTaq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5。
3、建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。
4、模板DNA推荐用量(50 μl 标准PCR体系)
人类基因组DNA |
0.1 μg ---1 μg |
λDNA |
0.5 ng---5 ng |
质粒DNA |
0.1 ng-10 ng |
大肠杆菌DNA |
10 ng-100 ng |
5、如进行PCR扩增后,除目的条带外,还伴随其他杂带,建议适当减少体系中的Taq酶用量,以增加PCR扩增反应的特异性。
问:如何利用HSTMTaq DNA聚合酶进行加A反应?
答:由高保真DNA 聚合酶(如Pfu)产生的PCR 扩增片段的纯化产物1-7μl;
加入1μl HSTMTaq DNA 聚合酶10×反应缓冲液(含MgCl2);
加入dATP 至终浓度0.2 mM;
加入5 U的HSTMTaq DNA 聚合酶;
加超纯水至终反应体积为10μl;
70℃孵育15-30 分钟;
进行TA克隆。