CD40 免疫组化试剂盒

该试剂盒以 HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，

HRP-SA）为基础，可用于检测血液,细胞、组织内的特异性 CD40 抗原。该试剂盒

具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的 CD40 一抗与相

应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入 HRP-SA，形成抗

原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。

试剂盒所含试剂：

试剂 A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）

试剂 B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL

试剂 C （原装进口分装）已稀释的即用型 CD40 一抗（2.5ml）

试剂 D （原装进口分装）生物素化羊抗兔 IgG 1 支

（浓度 1.5 mg/mL，稀释比为 1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液 20ml

试剂 E HRP-SA 复合物 1 支（浓度 1 μM，稀释比 1:50~1:200）100 μL

试剂 F DAB 显色液 5ml

用户自备试剂：

1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）

三羟基氨基甲烷 1.21g

氯化钠 7.6g

加蒸馏水 800mL，浓盐酸调 pH 值至 7.2~7.4，最后定容至 1000mL

TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）

2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）

10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液

柠檬酸 0.38g

柠檬酸三钠 2.45g

加蒸馏水 900mL，浓盐酸调 pH 值至 6.0，最后定容至 1000mL

或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）

EDTA·2H2O 186.1g

加蒸馏水 700mL，用 10mM NaOH 调 pH 值至 8.0，最后定容至 1000Ml

3. 缓冲甘油封固剂 10 mL

4. Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片免疫染色

实验步骤（建议方案）：

石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度

1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr；

2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次

10 min；

3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%

乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min；

4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温

度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×

2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复，

直接进入第 5 步封闭。

5.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min；

6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜；

7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；

8.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min；

9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育

30 min；

10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；

11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min；

12.加 HRP-SA： 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM），37

℃湿盒中孵育 30 min；

13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；

14.显色：应用 DAB 溶液（试剂 F）显色；

15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；

16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片