鲁米诺
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鲁米诺及其他环状二酰基酰胺(cyclic diacylhydrazides)化合物是辣根过养花物酶的化学发光协同底物。采用鲁米诺、过养花亲及一种增效剂(如4-碘苯酚或4-羟基肉桂酸),辣根过养花物酶的碱性同工酶可被检测出的最小量<5amol(5 X 10-18mo/L)(Whitehead et al.1983; Thorpe et al. 1985; Thope and Kricka 1986)。过养花物酶的酸性同工酶被增强的效率较低。增效剂的作用是增强发光亮度并减少由于过养花物或其他养花剂导致鲁米诺养花所产生的背景发光。这种双重效果能奇迹般地使过养花物酶活性的分析以及分析的信噪比增强数千倍(这种增强化学发光试剂可从Amersham获得)。过养花物酶的这种灵敏的检测方法(较比色分析的灵敏度高10倍以上〉己经与催化报道分子沉积方案(catalyzed reporter deposition protocol)有效的结合(Wigle et al. 1993)。在这个放大方案中,过养花物酶标记与酪胺生物素底物反应所产生的高活性基团再与标记物,以及与标记物直接相邻的任何蛋白质反应。然后,沉积的生物素与链霉亲和素过养花物酶作用(通过这种方式,原来的过养花物酶标记被放大了许多倍),从而使结合的过养花物酶通过增强的化学发光法得到检测。采用催化报道分子沉积方案与化学发光分析相结合的方法,与沉积过养花物酶比色分析(colorimetric detection)相比可使灵敏度显著提高。 武
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