GSK-3活性检测

在不同浓度的SB 216763下，在含人GSK-3α（终浓度为1 nM），50 mM MOPS pH 7.0，0.2 mM EDTA，10 mM Mg-acetate，7.5 mM β-巯基乙醇，5% (w/v) 甘油，0.01% (w/v) Tween-20, 10% (v/v) DMSO以及28 μM GS-2多肽底物的反应混合物中，测定GSK-3激酶活性。GS-2多肽序列对应于糖原合酶中被GSK-3磷酸化的区域。加入0.34 μCi [33P]γ-ATP开始实验。ATP总浓度为10 μM。实验在室温下进行30分钟后，加入含21 mM ATP的2.5% (v/v) H3PO4（1/3实验体系体积），终止反应。将样品加到P30磷酸纤维垫上，然后用0.5% (v/v) H3PO4冲洗6次。将过滤垫密封进含Wallac betaplate闪烁液的样品袋中。在Wallac microbeta闪烁计数器中测定过滤垫，计算整合到底物肽中的33P量。

细胞系

小脑颗粒神经元

制备方法

在DMSO中的溶解度大于56.8mg/mL。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37 °C加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20 °C可放置数月。

反应条件

0.1 ~ 10 μM；48小时

实验结果

SB 216763浓度依赖性地减少由钾剥夺或LY-294002处理诱导的小脑颗粒神经元死亡。3 μM SB 216763具有最强的神经保护作用。

动物模型

Bleomycin (BLM) 诱导的肺炎和肺纤维化小鼠模型

给药剂量

20 mg/kg；静脉注射

实验结果

在Bleomycin (BLM) 诱导的肺炎和肺纤维化小鼠模型中，SB 216763显着减少巨噬细胞产生的炎性细胞因子MCP-1和TNF-α，从而有效抑制肺炎和后续的肺纤维化。此外，SB 216763显着延长生存期，并通过抑制肺泡上皮细胞损伤以显着减少肺泡炎。

其它注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

[1]. Coghlan MP, Culbert AA, Cross DA, Corcoran SL, Yates JW, Pearce NJ, Rausch OL, Murphy GJ, Carter PS, Roxbee Cox L, Mills D, Brown MJ, Haigh D, Ward RW, Smith DG, Murray KJ, Reith AD, Holder JC. Selective small molecule inhibitors of glycogen synthase kinase-3 modulate glycogen metabolism and gene transcription. Chem Biol. 2000 Oct;7(10):793-803.

[2]. Cross DA, Culbert AA, Chalmers KA, Facci L, Skaper SD, Reith AD. Selective small-molecule inhibitors of glycogen synthase kinase-3 activity protect primary neurones from death. J Neurochem 2001,77:94-102.

[3] Gurrieri C, Piazza F, Gnoato M, Montini B, Biasutto L, Gattazzo C, et al. 3-(2,4-dichlorophenyl)-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-1H-pyrrole-2,5-dione (SB216763), a glycogen synthase kinase-3 inhibitor, displays therapeutic properties in a mouse model of pulmonary inflammation and fibrosis. J Pharmacol Exp Ther 2010,332:785-794.