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SYBR Green qPCR Master Mix(Low ROX)
本半岛bd体育手机客户端 不向个人销售，仅用作科学研究，不用于任何人体实验及非科研性质的动物实验。
包装与价格：
包装 价格(元)
1 ml 电议
1 ml * 5 电议
1 ml * 20 电议

半岛bd体育手机客户端 介绍
SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX)

注意事项

  1. SYBR Green Master Mix (Low ROX) 在 -80℃ 存放可能会产生白色或淡黄的沉淀，可用手握缓慢溶解，于室温短时间避光放置，轻柔上下颠倒混匀直至沉淀全部消失。不影响试剂性能。
  2. 使用前，请上下轻轻颠倒混匀，避免产生气泡，然后进行短暂的离心，防止因混合不均匀造成反应效果不佳。
  3. 避免反复冻融，防止聚合酶活性下降，可将半岛bd体育手机客户端 分装保存，以便小剂量的多次使用。
  4. 由于SYBR Green I荧光染料随着时间的推移可能会在光照下褪色，从而导致敏感性下降，因此在存储和使用过程中要避免强光照射。
  5. 由于qPCR反应的高灵敏度，空气或气溶胶的污染可能导致反应失败或结果不准确。因此请使用无菌的针尖、灭菌过的试管和移液管在清洁的环境中进行qPCR反应
  6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作，再配置反应体系或者分装时请一定使用新(无污染)枪头、Microtube 等，避免污染。
  7. 本半岛bd体育手机客户端 仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

结果分析

  1. 定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。
  2. 扩增曲线：一般CT值的正常范围为15-35之间，其中20-28之间 的定量较为准确。如果CT值过小，则需重新稀释模板；如果CT值过 大，则需适当提高模板浓度、提高引物浓度以及调试最佳QPCR程序。
  3. 溶解曲线：通常只有溶解曲线为单峰时，才为有效定量结果。如果溶解曲线出现多峰，则需优化条件重新实验，常见方法通常需要重新设计引物等。

反应体系(以50 μL和20 μL为例，推荐冰上配制)

组分 体积（μl） 体积（μl） 终浓度
qPCR SYBR Green Master Mix (Low ROX) 25 10 1×
Forward Primer (10μM) 1 0.4 0.2μM
Reverse Primer (10μM) 1 0.4 0.2μM
模板DNA X X
无菌超纯水 to 50 to 20
总反应体系 50 20

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2μM，也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。
b) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d) 反应体系：推荐使用20μl或50μl，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。


扩增程序（两步法）

循环步骤 温度 时间 ** 循环数**
预变性 95 °C 5 min 1
变性 95 °C 10 sec 40
退火/延伸 60 °C 30 sec ★ 40
溶解曲线阶段 半岛游戏平台官网入口网址 默认设置 1

扩增程序（三步法）

循环步骤 温度 时间 循环数
预变性 95 °C 5 min 1
变性 95 °C 10 sec 40
退火 55-60 °C 20 sec 40
延伸 72 °C 20 sec ★ 40
溶解曲线阶段 半岛游戏平台官网入口网址 默认设置 1

【注】高特异性可选择两步法，高效率扩增可选择三步法。
a) 预变性时间：根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2min。
b) 退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c) 荧光信号采集（★）：请按照半岛游戏平台官网入口网址 使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见半岛游戏平台官网入口网址 的时间设定如下：
30 sec以上：Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus,7500 Fast；Roche Applied Science: LightCycler 480；Bio-Rad: CFX96
31 sec以上：Applied Biosystems: 7300
34 sec以上：Applied Biosystems: 7500
d) 熔解曲线：通常情况下可以使用半岛游戏平台官网入口网址 默认程序。

适用机型

本品内含 Low ROX Reference Dye，适用于需要校正孔间荧光信号误差的半岛游戏平台官网入口网址 ，适用机型如下：
AppliedBiosystems: 7500,7500 Fast,ViiA7,QuantStudio Dx, QuantStudio3 and 5, QuantStudio6,7,12k Flex;
Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000.

半岛bd体育手机客户端 应用

  • 基于荧光定量PCR检测
  • 核酸扩增和基因表达
  • 自动化和高通量的定量基因分型研究
  • 基因组学相关应用
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