半岛bd体育手机客户端 及特点

刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)又叫海水小瓜虫，属原生动物门、纤毛亚门、寡膜纤毛纲、膜口亚纲、膜口目、凹口科、隐核虫属的一种。刺激隐核虫常寄生于海水硬骨鱼类的皮肤、鳃的上皮下，可引起鱼类的传染性疾病。刺激隐核虫病是海水鱼养殖中危害***寄生虫性疾病,又被渔民称为海水鱼白点病。目前,刺激隐核虫病尚不属于国家规定的水生动物疫病和人鱼共患疾病,但因其传染性较强,可感染尖吻鲈、紫红笛鲷、东方鲀、大黄鱼、美国红鱼、鲈鱼、金鲳、石斑鱼、蓝子鱼、白胡椒鲷、真鲷、黑鲷、平鲷、红鳍笛鲷等各个品种的海水网箱养殖鱼类,危害严重时甚至形成暴发性流行的水生动物疫病,特别是鱼苗,感染率和死亡率均可达 100%,造成重大的经济损失，因此刺激隐核虫的快速检测具有重要的意义。本试剂盒根据 PCR原理开发，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供细菌 DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增刺激隐核虫。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL(亮黄盖)
超纯水	100935	1 mL(蓝色)
刺激隐核虫 PCR引物混合液	13-56100yw	100 μL(白盖)
刺激隐核虫 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)	13-56100pc	50 μL(黄盖)
核酸释放剂试用装	61202	20次(1mL，绿盖)
使用手册	13-56100sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对照)，一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2、用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20次免 DNA提取的核酸释放剂，本半岛bd体育手机客户端 的裂解液可以直接作为 PCR模板，省略了 DNA提取步骤。

二、设置 PCR反应(40 μL体系)

3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
刺激隐核虫 PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品 DNA模板	各 18 μL	-	-
样品制备阴性对照(超纯水)	-	18 μL	-
刺激隐核虫 PCR的 1000倍稀释液	-	-	18 μL

4、按下表设置 PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	15 sec
PCR反应(35个循环)	55℃	15 sec
PCR反应(35个循环)	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取 10-20μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 387bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。