半岛bd体育手机客户端 及特点

肾棒状杆菌(Corynebacterium renale)革兰氏染色阳性，为球杆状或棍棒状，呈单在、成丛或栅栏样排列。细菌性肾盂肾炎由肾棒状杆菌引起，主要发生于母牛，公牛少见，马和绵羊偶可发生。本病为尿源性感染，因此病原菌经尿道生殖道口感染后，先引起尿道炎、膀胱炎或子宫内膜炎，然后再逆行导致肾盂肾炎。由于肾组织损伤与尿液滞留，最终病畜可因尿毒症而死亡。病牛主要表现发热，食欲不振，尿频，尿少，尿因混有黏液、脓液、大量蛋白质、脓细胞和白细胞、脱落的上皮细胞等而浑浊带血色。尿液涂片或细菌培养可发现病原菌。严重病例常发生尿毒症。因此牛肾盂肾炎棒杆菌检测具有重要的意义。本试剂盒根据 PCR原理开发，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增牛肾盂肾炎棒杆菌。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL(红盖)
超纯水	100935	1 mL(亮黄色)
牛肾盂肾炎棒杆菌 PCR引物混合液	13-15850yw	100 μL(白盖)
牛肾盂肾炎棒杆菌 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)	60908-15850pc	100 μL(黄盖)
DNA释放剂(试用装)	130982	20次(1mL、绿盖)
使用手册	13-15850sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对照)，一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2、用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout或柱式细菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 50次免 DNA提取的 DNA释放剂，本半岛bd体育手机客户端 的裂解液可以直接作为 PCR模板，省略了 DNA提取步骤。

二、设置 PCR反应(40 μL体系)

3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
牛肾盂肾炎棒杆菌 PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品 DNA模板	各 18 μL	-	-
样品制备阴性对照	-	18 μL	-
样品制备阳性对照	-	-	18 μL

4、按下表设置 PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	55℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。