半岛bd体育手机客户端 及特点

白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus, WSSV)能感染近海多种甲壳类生物，是对虾病毒病的最重要病原。感染 WSSV 5～7天，对虾死亡率高达 100%。因此，研发一种快速简单、定量准确、实用高效的 WSSV定量检测方法具有重要的社会意义。本半岛bd体育手机客户端 即是基于荧光定量 PCR法的白斑综合症病毒快速检测试剂盒。本试剂盒具有下列特点它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供病毒 DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增 WSSV，不跟其他病毒发生交叉反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL(亮黄盖)
超纯水	100935	1 mL(蓝色)
WSSV PCR引物混合液	13-10400yw	100 μL(白盖)
WSSV PCR阳性对照	13-10400pc	100 μL(黄盖)
DNA病毒裂解液(试用装)	3674a	15次(9 mL)
使用手册	13-10400sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。WSSV PCR阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout或其升级版柱式病毒 DNAout 。本试剂盒免费赠送 15次 DNA病毒裂解液 (一管式病毒 DNAout)。

2、如果要制备 N个样品，则需要做 N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL水中加

10μL WSSV PCR阳性对照的 10000倍稀释液作为阳性对照，样品制备阴性对照是直接用 200μL水。提取结束后最后得到 200μL模板 DNA(每个样品)放冰上待用，溶解 DNA沉淀的溶液不能少于 200μL，否则 PCR抑制物很可能会抑制 PCR。

二、设置 PCR反应(40 μL体系)

3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阴性对照(用水)和一个 PCR阳性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个样品管	PCR阴性对照管	PCR阳性对照管
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
WSSV PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品 DNA模板	各 18 μL	-	-
PCR阴性对照(水)	-	18 μL	-
PCR阳性对照(WSSV PCR阳性对照的 10000倍稀释液)	-	-	18 μL

4、按下表设置 PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	93℃	2 min
PCR-1反应(10个循环)	93℃	45 sec
PCR-1反应(10个循环)	55℃	60 sec
PCR-2反应(30个循环)	93℃	30 sec
PCR-2反应(30个循环)	45℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。2%琼脂糖电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 143bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。