半岛bd体育手机客户端 及特点

本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有大鼠的成分。现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本半岛bd体育手机客户端 就是为满足这一需求根据探针法 qPCR原理开发的半岛bd体育手机客户端 ，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供样品 DNA模板。

2、根据大鼠保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的大鼠成分，但不能检测其他非大鼠成分。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、一管式闭管操作，降低了交叉污染。

5、快速，整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 2.0小时。

6、对混合样品中大鼠成分的检测下限为 0.01%，对样品中大鼠成分的核酸检测下限为0.1ng/μL。

7、本只能用于科研，足够 50次 20μL体系的荧光定量 PCR。

规格及成分

成分	编号	十孔盒包装
2×Probe qPCR MagicMix	190303	500 μL(本色盖)
荧光 PCR专用模板稀释液	180701	1 mL(黄盖)
大鼠源性成分探针法 qPCR引物混合液	15-102yw	100 μL(白盖)
大鼠源性成分 qPCR探针	15-102pb	50 μL(棕色管)
大鼠源性成分探针法 qPCR阳性对照(1×108拷贝/μL)	60908-102pc	50 μL(黄盖)
核酸释放剂(试用装)	61202	20次(1mL，绿盖)
使用手册	15-102sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。**在专门的区域操作。

自备试剂

DNA模板

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以 10²-10⁷拷贝/μL这 6个 10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。

1、标记 6个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2、用带芯枪头分别加入 45 μL荧光 PCR专用模板稀释液，**用带芯枪头，下同)。

3、在 7号管中加入 5 μL阳性对照(浓度为 1×10⁸拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1分钟，得 1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4、换枪头，在 6号管中加入 5 μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1分钟，得 1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5、换枪头，在 5号管中加入 5 μL 1×10⁶拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1分钟，得 1×10⁵拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6、重复上面的操作直到得到 6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA的制备

7、用自选方法纯化样品的 DNA，本半岛bd体育手机客户端 跟市场上绝大多数核酸纯化半岛bd体育手机客户端 兼容。

8、如果有 N个样品，则需要进行 N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的核酸释放剂试用装，则请按手册操作，制备样品。

三、设置 qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)

9、如果做定量分析并且只做 1次重复，则标记 N+9个 PCR管，其中 N+2个用于上步得到的 N+2个样品，1个用于 PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1次重复，则标记 N+4个 PCR管，其中 N+2个用于上步得到的 N+2个样品，1个用于 PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于 PCR阳性对照(用**步稀释得到的标准曲线系列稀释液的第 4号做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10、在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复)：

成分	样品管N+2个	PCR阴性对照管	标准曲线样品管(2-7管)
2×Probe qPCR MagicMix	10 μL	10 μL	各 10 μL
大鼠源性成分探针法 qPCR探针	1 μL	1 μL	各 1 μL
大鼠源性成分探针法 qPCR引物混合液	2 μL	2 μL	各 2 μL
N+2个待测样品 DNA模板	7 μL	-	-
超纯水	-	7 μL	-
第 7步所得标准曲线样品稀释液(2-7号)	-	-	各 7μL(2号样到 2号管，3号样到 3号管…)

四、qPCR反应参数

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(40个循环)	95℃	15sec
PCR反应(40个循环)	60℃	1 min(采集 FAM通道的荧光信号)

五、数据处理

11、如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log值为横轴，以 Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct值从标准曲线上推算出样品 DNA浓度的log值，再推算出其浓度。

12、如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct必须大于或等于39。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于39则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-39之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于39则为阴性，如果小于35，则为阳性。