半岛bd体育手机客户端 及特点

肉毒梭状芽孢杆菌广泛存在于自然界，是一种专性厌氧的腐生菌，革兰阳性，菌体粗大，具有 4～8根周毛性鞭毛、运动迟缓，没有荚膜，芽孢卵圆形、近端位、芽孢比繁殖体宽。肉毒梭菌产生的肉毒毒素本质是蛋白质，为神经毒素，共产生六种毒素:A、B、C、D、E、F，其中的 A、B、E、F与人类的食物中毒有关。肉毒毒素毒性剧烈，少量毒素即可产生症状甚至致死，对人的致死量为 0.1μg。毒素摄入后经肠道吸收进入血液循环，输送到外围神经，毒素与神经有强的亲和力，阻止乙酰胆碱的释放，导致肌肉麻痹和神经功能不全。本公司开发肉毒梭状芽孢杆菌 PCR试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供病毒 DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增肉毒梭状芽孢杆菌，与其他病毒没有交叉反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR Magic Mix 3.0	90805	1mL(红盖)
超纯水	100935	1mL(蓝盖)
肉毒梭状芽孢杆菌 PCR引物混合液	13-34510yw	100 μL(白盖)
肉毒梭状芽孢杆菌 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)	60908-34510pc	50 μL(黄盖)
使用手册	13-34510sc	1份

注：为避免扩散传染性病原，本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12个月。肉毒梭状芽孢杆菌 PCR阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、用自选方法纯化 N+2个样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒核酸提取试剂盒兼容。

2、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对照)，一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL肉毒梭状芽孢杆菌探针法荧光定量 PCR试剂盒 PCR阳性对照的 1000倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、如果有 N+2个样品，则标记 N+4个 PCR管(额外增加的两个管一个是 PCR阳性对照，另一个是 PCR阴性对照)并按照下表在 PCR管中加入下列成分：

成份	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3 .0	各 20μL	20 μL	20 μL
肉毒梭状芽孢杆菌 PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个制备的 RNA样品	各 18 μL	-	-
PCR阴性对照(水)	-	18 μL	-
肉毒梭状芽孢杆菌 PCR阳性对照10000倍稀释液	-	-	18μL

4、上机进行 PCR，PCR反应参数为:

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	55℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。