半岛bd体育手机客户端 及特点

鸡传染性贫血病毒(Chicken Infectious Anemia Virus，CIAV)会引起鸡贫血因子病，是一种雏鸡再生障碍性贫血、全身淋巴组织萎缩、皮下和肌肉出血为特征的一种免疫抑制性疾病，本病的**特征性症状是贫血。一般在感染后 10天发病，14～16天达到高峰。病鸡表现为精神沉郁，虚弱，行动迟缓，羽毛松乱，喙、肉髯、面部皮肤和可视粘膜苍白，生长不良，体重下降；临死前还可见到拉稀。血液稀薄如水，红细胞压积值降到 20%以下，对养鸡业有较大影响，因此鸡传染性贫血病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本半岛bd体育手机客户端 是根据 PCR原理开发的鸡传染性贫血病毒检测试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增鸡传染性贫血病毒。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR Magic Mix 3.0	90805	1 mL(红盖)
超纯水	100935	1 mL(亮黄色)
鸡传染性贫血病毒 PCR引物混合液	13-72300yw	100 μL(白盖)
鸡传染性贫血病毒 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)	60908-72300pc	50 μL(黄盖)
使用手册	13-72300sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

2、如果有 N个样品，则需要做 N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL鸡传染性贫血病毒 PCR阳性对照的 10000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
鸡传染性贫血病毒 PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品 DNA模板	各 18 μL	不加	不加
PCR阴性对照(水)	不加	18 μL	不加
PCR阳性对照(鸡传染性贫血病毒 PCR阳性对照的 10000倍稀释液)	不加	不加	18 μL

4、按下表设置 PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	55℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR产物阳性对照必须有预期片段大小条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。