半岛bd体育手机客户端 及特点

犬冠状病毒(Canine coronavirus，CCV )为单链 RNA病毒，有 6～7种多肽，其中 4种是糖肽，不含 RNA聚合酶及神经氨酸酶。可使犬发生程度不同的胃肠炎症状，特征有频繁呕吐、腹泻、沉郁、厌食等症状。本病一年四季均可发生，以冬季多发，病犬是主要的传染原，犬可通过呼吸道、消化道、粪便及污染物传染。该病一但发生，同窝犬同室犬很难控制均可造成感染。幼犬死亡率较高,对幼犬的危害较大。最近的研究发现,CCV感染的宿主范围有不断扩大的趋势,许多野生动物如虎、狮、大熊猫、小熊猫、水紹也可感染。所以对犬呼吸道病毒的快速准确检测与鉴定具有重要的临床意义。本半岛bd体育手机客户端 根据 RT-PCR原理开发，它具有下列特点：

1、使用一管式 RT-PCR试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差。

2、灵敏度高于过去使用的 ELISA方法，能达到至少 1000拷贝/反应。

3、简单快速，用户不需单独准备每种试剂。

4、针对犬冠状病毒 M保守区设计，检测的特异性强。

5、用于 CCV的定性鉴定检测和分子流行病学调查。

规格及成分

成分	编号	十孔盒包装
双酶一管式 RT-PCR Buffer，2×	91202A	750 uL
MMLV-Taq Mix	91202B	100 uL
CCV专一性引物对	yw14191420	100 uL
CCV阳性对照(108拷贝/uL)	Yw14211422	50 uL
超纯水	100935	1 mL
使用手册	11-2130sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限一年。

自备试剂

一管式病毒 RNAout或柱式病毒 RNAout

使用方法

一、样品 RNA的制备用自选方法纯化可能含 CCV样品的 RNA，也可以另购本公司的一管式病毒RNAout或柱式病毒 RNAout，上述两款半岛bd体育手机客户端 跟本试剂盒兼容。

二、阳性对照

1、为增加半岛bd体育手机客户端 稳定性和避免扩散传染性病原，本半岛bd体育手机客户端 不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA片段作为阳性对照。

2、使用本阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。**在专门的区域操作。

三、设置 RT-PCR反应(30 uL体系)

3、在 PCR管中加入下列成分：

成份	样品	阳性对照	阴性对照
双酶一管式 RT-PCR Buffer，2×	15 uL	15 uL	15 uL
CCV专一性引物对	2 uL	2 uL	2 uL
样品 RNA	1-5 uL	无	无
CCV阳性对照	无	2 uL	无
补超纯水到	28 uL	28 uL	28 uL
MMLV-Taq Mix	2 uL	2 uL	2 uL

4、轻柔混匀后上机，按下面参数进行 RT-PCR。

过程	温度	时间
逆转录	60℃	30分钟
预变性	94℃	2分钟
PCR反应(30个循环)	94℃	30 s
PCR反应(30个循环)	49℃	30 s
PCR反应(30个循环)	72℃	30 s
延伸	72℃	5分钟

5、电泳检测 RT-PCR产物。预期的 PCR产物长度为 384bp。