半岛bd体育手机客户端 及特点

非洲柑桔黄龙病菌(CandidatusLiberobacterAfricanum)是一种类菌体，柑桔感染黄龙病后，全年均可发生，一般以夏梢和秋梢发病最多，其次是春梢。新梢的症状是叶片表现黄化和黄绿相间的斑驳。在叶片凋落后，枝梢上新长出的叶片表现缺素状的花叶。病梢变短、生势衰弱，病叶黄厚、变小，且易脱落，形成枯枝。开花不适时，花开的多、落得多。果小而畸形，或红鼻果。后期，根部往往表现为小根腐烂。此菌可以侵染芸香科柑橘属和金橘属植物，引发症状。在田间未见枳发病，仅枳橙发病。通过菟丝子，此菌可以侵染长春花。在自然界，芸香科蚝壳刺属和木苹果属植物可能受此菌侵染，九里香属植物常见着生大量传播柑橘黄龙病的柑橘木虱，但其体内未见病原菌。，因此非洲柑桔黄龙病菌检测具有重要的意义。本试剂盒根据荧光定量PCR原理开发，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供细菌DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增非洲柑桔黄龙病菌。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix3.0	90805	1 mL(亮黄盖)
超纯水	100935	1 mL(蓝色)
非洲柑桔黄龙病菌PCR引物混合液	13-1570yw	100μL(白盖)
非洲柑桔黄龙病菌PCR阳性对照	13-1570pc	100μL(黄盖)
DNA释放剂试用装	130982	50次(试用装)
使用手册	13-1570sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品DNA。

使用方法

一、样品DNA的制备

1、如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。

2、用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNAout或柱式细菌DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂，本半岛bd体育手机客户端 的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。

二、设置PCR反应(40μL体系)

3、对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各20μL	20μL	20μL
非洲柑桔黄龙病菌PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	-	-
样品制备阴性对照	-	18μL	-
样品制备阳性对照	-	-	18μL

4、按下表设置PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	94℃	5 min
PCR反应 (35个循环)	94℃	20sec
	58℃	20sec
	72℃	30sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取10-20μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。预期的PCR产物长度为208bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。