半岛bd体育手机客户端 及特点

耳念珠菌( Candida auris )是一种近年来出现的酵母，该菌株可引起侵袭性感染，对氟康唑等抗真菌药物呈现多重耐药性，感染患者具有较高的死亡率。耳念珠菌可引起血流感染、伤口感染和耳炎。本半岛bd体育手机客户端 是根据 PCR原理开发检测耳念珠菌的试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR50次，但只能用于科研。

规格及成分

成分	编号	五孔盒包装
PCR Magic Mix 3.0	90805	1mL(绿盖)
超纯水	100935	1mL(黄色)
耳念珠菌 PCR引物混合液	13-60250yw	100μL(白盖)
耳念珠菌 PCR阳性对照(1×107拷贝/μL)	pc60250-MZ323988.1	50μL(黄盖)
使用手册	13-60250sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

2、如果有 N个样品，则需要做 N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加10μL PCR阳性对照的 10000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水，提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：

成分	样品管N+2个	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix3.0	各 20μL	20μL	20μL
耳念珠菌 PCR引物混合液	各 2μL	2μL	2μL
N+2个样品 DNA模板	各 18μL	不加	不加
PCR阴性对照(水)	不加	18μL	不加
PCR阳性对照(耳念珠菌 PCR阳性对照的 10000倍稀释液)	不加	不加	18μL

4、按下表设置 PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	98℃	10min
PCR反应(40个循环)	98℃	30sec
PCR反应(40个循环)	60℃	30sec
最后延伸	72℃	10min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物，进行电泳。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后需要另外再加 loading buffer。PCR产物阳性对照必须有预期片段大小条带出现，预期片段

110bp。阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。