半岛bd体育手机客户端 及特点

牛轮状病毒病( Bovine RotaVirus )是由轮状病毒(呈圆形，似车轮状)引起的多种幼龄动物和婴幼儿的急性胃肠道传染病。剖检可见病毒主要侵害小肠，特别是空肠和回肠部，呈现肠壁变薄，内容物液状，小肠绒毛萎缩。目前这种病主要有精神委顿、厌食、呕吐、腹泻、脱水五个特征症状。一般情况死亡率不超过10%，但若有继发感染，特别在恶劣气候情况下，病犊感染肺炎，则死亡率将大大提高。为此本公司开发了本半岛bd体育手机客户端 ，可用于在科研领域检测牛轮状病毒。它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增牛轮状病毒，与其他病原没有交叉反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL(红盖)
超纯水	100935	1 mL(亮黄盖)
牛轮状病毒PCR引物混合液	yw13-76120	100μL(白盖)
牛轮状病毒PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)	60908-76120pc	50μL(黄盖)
使用手册	13-76120sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品DNA。

使用方法

一、样品DNA的制备

1、用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式细菌DNAout。

2、如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加10μL牛轮状病毒PCR阳性对照的1000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板DNA放冰上待用。

二、设置PCR反应(40μL体系)

3、对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
牛轮状病毒 PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	-	-
PCR阴性对照(水)	-	18μL	-
PCR阳性对照(牛轮状病毒PCR阳性对照的1000倍稀释液)	-	-	18μL

4、按下表设置PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	15sec
	57℃	15sec
	72℃	40sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取10-20 μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。PCR产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。