半岛bd体育手机客户端 及特点

巴尔通体(Bartonella spp.)属于变形菌纲、根瘤菌目、巴尔通体科、巴尔通体属，是一群革兰染色阴性、氧化酶阴性、营养条件要求苛刻、兼性细胞内寄生的需氧杆菌，主要寄生在人、猫、狗和啮齿动物等血管内皮细胞和红细胞内，通过跳蚤、体虱和白蛉等传播，可引起人类患有猫抓病、战壕热、杆菌性血管瘤、心内膜炎和卡瑞恩病等疾病。在自然界存在已久、分布广泛，且有该病暴发流行。本半岛bd体育手机客户端 是根据 PCR原理开发的巴尔通体通用检测试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增巴尔通体通用，与其他病原没有交叉反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR Magic Mix 3.0	90805	1 mL(红盖)
超纯水	100935	1 mL(亮黄色)
巴尔通体通用 PCR引物混合液	13-31300yw	100 μL(白盖)
巴尔通体通用 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)	60908-31300pc	50 μL(黄盖)
使用手册	13-31300sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式细菌 DNAout。

2、如果有 N个样品，则需要做 N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL巴尔通体通用 PCR阳性对照的 10000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
巴尔通体通用 PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品 DNA模板	各 18 μL	-	-
PCR阴性对照(水)	-	18 μL	-
PCR阳性对照(巴尔通体通用 PCR阳性对照的10000倍稀释液)	-	-	18 μL

4、按下表设置 PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	55℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	72℃	25 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

附件：用本试剂盒可以检测的巴尔通体种名

Bartonella alsatica	巴尔萨斯巴尔通体
Bartonella bacilliformis	杆菌样巴尔通体
Bartonella clarridgeiae	克氏巴尔通体
Bartonella doshiae	道志巴尔通体
Bartonella elizabethae	伊丽莎白巴尔通体
Bartonella grahamii	格拉汉姆巴尔通体
Bartonella henselae	汉赛巴尔通体
Bartonella koehlerae	克勒巴尔通体
Bartonella quintana	五日热巴尔通体
Bartonella tribocorum	特里波契巴尔通体
Bartonella vinsonii	文森巴尔通体阿鲁潘亚种