半岛bd体育手机客户端 及特点

对虾杆状病毒(BaculovirusPenaei)是一种能在细胞核内产生金字塔状的包涵体的病毒，会引起对虾的肝胰腺或中肠上皮细胞核内由于感染多角体杆状病毒而引起的多种对虾的急性传染病。除了死亡特征外，受BP感染的虾也表现为摄饵减少，生长速度降低，虾体表面因附生或共栖生物增多而出现烂鳃或细菌的混合感染等非特定症状，对野生对虾资源有巨大危害，因此快速检测对虾杆状病毒具有重要意义。本半岛bd体育手机客户端 具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供病毒DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增对虾杆状病毒，与其他病毒没有交叉反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix3.0	90805	1 mL(亮黄盖)
超纯水	100935	1 mL(蓝色)
对虾杆状病毒PCR引物混合液	13-10500yw	100μL(白盖)
对虾杆状病毒PCR阳性对照 (1×108拷贝/μL)	13-10500pc	50μL(黄盖)
核酸释放剂	61202	50次(9mL)
使用手册	13-10500sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。对虾杆状病毒PCR阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品DNA。

使用方法

一、样品DNA的制备

1、用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送15次核酸释放剂试用装。

2、如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在200μL水中加10μL对虾杆状病毒PCR阳性对照的10000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用200μL水。提取结束后最后得到200μL模板DNA(每个样品)放冰上待用，溶解DNA沉淀的溶液不能少于200μL，否则PCR抑制物很可能会抑制PCR。

二、设置PCR反应(40μL体系)

3、对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各20μL	20μL	20μL
对虾杆状病毒PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	-	-
PCR阴性对照(水)	-	18μL	-
PCR阳性对照(对虾杆状病毒PCR阳性对照的10000倍稀释液)	-	-	18μL

4、按下表设置PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	45sec
	54℃	45sec
	72℃	30sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取10-20μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。预期的PCR产物长度为319bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。