半岛bd体育手机客户端 及特点

大巴贝虫(Babesia major)是寄生在人和脊椎动物红细胞内的原虫，典型形态为梨形，常在一个红细胞内有多个虫体寄生，可感染人兽共患寄生虫病。常见症状包括寒战、发热、出汗、乏力、恶心、食欲减退、肌肉疼痛、关节疼痛、头痛、腹痛、贫血或血红蛋白尿等。重症临床表现为高热(体温可达40℃)、重度贫血、血红蛋白尿、呈酱油色尿、黄疸、呼吸窘迫、肾功能衰竭或晕过去，甚至死亡，病人肝功能异常。据此，专家们认为，及早发现巴贝虫病感染者，及时而有效地用抗菌素杀灭巴贝虫，对预防和控制病原菌有重大意义，因此快速检测巴贝虫病菌具有重要意义。

本半岛bd体育手机客户端 是根据PCR原理开发检测大巴贝虫的试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增大巴贝虫，与其他病原没有交叉反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL(红盖)
超纯水	100935	1 mL(亮黄盖)
大巴贝虫PCR引物混合液	13-32470	100μL(白盖)
大巴贝虫PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)	60908-32470pc	50μL(黄盖)
使用手册	13-32470sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品DNA。

使用方法

一、样品DNA的制备

1、用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式细菌DNAout。

2、如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加10μL大巴贝虫PCR阳性对照的1000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板DNA放冰上待用。

二、设置PCR反应(40μL体系)

3、对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
大巴贝虫PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	-	-
PCR阴性对照(水)	-	18μL	-
PCR阳性对照(大巴贝虫PCR阳性对照的1000倍稀释液)	-	-	18μL

4、按下表设置PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	15sec
	57℃	15sec
	72℃	40sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取10-20 μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。PCR产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。