半岛bd体育手机客户端 及特点

网状内皮增殖病是由网状内皮组织增殖症病毒(Reticuloendotheliosis Virus，REV)引起的一种肿瘤性传染病，病鸡表现为贫血、消瘦，生长缓慢等。病理解剖特点是肝脏、肠道、心脏和其它器官有淋巴瘤，胸腺和法氏囊萎缩，腺胃炎。本病能侵害机体的免疫系统，可导致机体免疫机能下降或继发其它疾病。本半岛bd体育手机客户端 就是专门用于 REV的 RT-PCR检测的试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供病毒 RNA模板。

2、提供阳性对照，便于在遇到问题时分析原因。

3、引物根据 REV病毒保守的 LTR序列设计，不与其他病毒发生交叉反应。

4、使用两步式 RT-PCR，先做 RT再做 PCR，操作更加灵活。

5、本试剂盒灵敏度可以达到 1000拷贝/反应。

6、本试剂盒足够 50次 20 μL体系的 RT反应，50次 40 μL体系的 PCR反应。

7、本半岛bd体育手机客户端 只用于科研

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
MMLV(含 RI)	60906a	50 μL(黄盖)
RT Buffer(含 dNTP)	60906b	250 μL(白盖)
超纯水	100935	1 mL(本色盖)
PCR MagicMix 3.0(含染料)	90805	1 mL(红盖)
网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR引物混合液	13-26500yw	100 μL(白盖)
网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR阳性对照	13-26500pc	50 μL(黄盖)
RNA病毒裂解液(试用装)	3073a	15次(10mL)
使用手册	13-26500sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12个月。收到试剂盒后**请将阳性对照放置到专门区域，因为其含有较高浓度的扩增产物，容易污染其他试剂。

自备试剂

样品 RNA。

使用方法

一、样品 RNA的制备

1、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对照)，一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL试剂盒提供的阳性对照再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。使用本阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。必须在专门的区域操作。

2、用自选方法纯化 N+2个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 15次 RNA病毒裂解液试用装(一管式病毒 RNAout的成分)。

二：设置 RT反应

3、如果有 N+2次 RNA提取，则按照下表设置 N+2个 RT反应体系(20 μL体系)：

成份	用量
RNA模板(自备)	1-10 μL即可
网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR引物混合液	2 μL
超纯水	补水到 14 μL
RT Buffer(含 dNTP)	5 μL
MMLV(含 RI)	1 μL

4、42℃保温 60 min，70℃保温 10 min以终止反应，然后放置在冰上待用。此为 cDNA样品。三、设置 PCR反应

5、对 N+2个 cDNA样品，则在 N+4个 PCR管中加入下列成分(多的一个是 PCR阴性对照，一个是 PCR阴性对照)：

成分	N+2个样品	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	20 μL	20 μL	20 μL
网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR引物混合物	2 μL	2 μL	2 μL
N+2个 cDNA样品	5 μL	不加	不加
网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR阳性对照	不加	不加	1 μL
补超纯水到	40 μL	40 μL	40 μL

6、上机进行 PCR，PCR反应参数为：

过程	温度	时间
逆转录	42℃	60 min
预变性	94℃	5 min
PCR反应(35个循环)	94℃	0.5 min
PCR反应(35个循环)	55℃	0.5 min
PCR反应(35个循环)	72℃	0.5 min
最后延伸	72℃	10 min

7、取 10uL PCR产物直接在 1%琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为 220 bp。阳性对照必须出现 220bp的 PCR产物，否则 RT-PCR体系有问题，需要寻找原因。如果阴性对照出现 220bp的 PCR产物，则说明试剂或环境中有过去 PCR产物的污染，需要把样品制备和 PCR反应后电泳充分隔离进行。如果发生了污染，则需要另外设计引物，本试剂盒提供的引物和阳性对照将不可用。