半岛bd体育手机客户端 及特点

禽支原体病是由禽类支原体(AvianMycoplasmaspp.)引起的家禽的一种传染病，主要包括鸡败血支原体病、鸡传染性滑液膜炎和火鸡支原体病。禽支原体病几乎在世界各地都有发生，已成为鸡群和火鸡群的一个重要问题。危害的鸡只达 13%以上，使其体重减少 38%，饲料转化率降低 21%。在火鸡中，可引起窦炎、气囊炎和以高死亡率为特征的传染性窦炎。本试剂盒是根据 PCR原理开发，具有下列特点：

1、免 DNA制备，直接用裂解液做 PCR，更加简单快捷。

2、根据禽类支原体保守区设计引物。

3、特异性高，跟其他微生物无交叉反应。

4、灵敏高，可检测低至几个拷贝/反应的支原体污染。

5、提供内参和无感染性的支原体阳性对照(DNA片段)，能有效避免实验结果的假阳性和假阴性。

6、可用于培养细胞、疫苗、血清、重组蛋白和耗材的污染检测。但不能用于临床诊断。

7、本半岛bd体育手机客户端 足够至少 50次 40μL体系 PCR检测(含阳性对照和阴性对照反应)。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL(红盖)
超纯水	100935	1 mL(亮黄盖)
禽类支原体通用 PCR引物混合液	13-38900yw	100 μL(白盖)
禽类支原体通用 PCR阳性对照 (1×108拷贝/μL)	13-38900pc	50 μL(黄盖)
核酸释放剂(试用装)	61202	20次(1mL、绿盖
使用手册	13-38900sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对照)，一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2、用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸纯化试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20次免 DNA提取的核酸释放剂，本半岛bd体育手机客户端 的裂解液可以直接作为 PCR模板，省略了 DNA提取步骤。

二、设置 PCR反应(40 μL体系)

3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个样品管	PCR阴性对照管	PCR阳性对照管
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
禽类支原体通用 PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品 DNA模板	各 18 μL	-	-
PCR阴性对照(超纯水)	-	18 μL	-
PCR阳性对照 (禽类支原体通用PCR阳性对照的 10000倍稀释液)	-	-	18 μL

4、按下表设置 PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	55℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物阳性对照必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。