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丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)
丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)图片
包装: 200ml 100ml


半岛bd体育手机客户端 介绍

转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶,丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT)主要存在于肝细胞浆内,细胞内 ALT浓度远高于血清,肝细胞破坏后血清 ALT立即迅速升高,因此谷 ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应,丙酮酸与 NADH经 LDH催化生成 NAD+,上述方法实际为 ALT速率法,其反应公式如下:L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD+。

在上述偶联反应中 NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比。对于单试剂速率法,血清与试剂完整成分的底物溶液混匀,ALT催化反应立即启动,通过分光光度计或自动分析仪检测在 340nm处吸光度下降速率(-ΔA/min),下降速率(-ΔA/min)与 ALT活性呈正比,进而计算酶的活性单位。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

半岛bd体育手机客户端 组成:

ALT检测液(R) 成分 终浓度 2×50ml 2×100ml 4℃避光
Tris缓冲液 100mM
L-丙氨酸 500mM
酮戊二酸 15mM
NADH 0.18mM
LDH 1700U/L
防腐剂 15mM
使用说明书 1份

自备材料:

1、蒸馏水

2、比色杯、分光光度计或自动分析仪

操作步骤(仅供参考):

1、准备样品:

①血浆、血清样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃保存 1个月有效,用于 ALT/GPT的检测。

②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-20℃保存 1个月有效,用于 ALT/GPT的检测。

③(选做)样品准备完毕后可以用 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的 ALT/GPT含量。

2、分光光度计检测:

按照下表设置对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。注意:由于酶促反应时间极短,Leagene建议立即检测,加样时间越短越好,其反应基本在 1~2min内,其后反应趋于平缓。Leagene对照检测参考值在 1~3min变化为 1.1~0.8之间。由于检测半岛游戏平台官网入口网址 、操作手法以及样品酶活性高低等条件的不同,参考值范围会有波动如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

加入物(μl) 对照管 测定管
ALT检测液(R) 900 900
混匀,37℃孵育 30min。

蒸馏水 45
待测样品 45
混匀,37℃孵育 60s,以空白调零,在 340nm处 1~3min各管吸光度变化,计算各管ΔA/min。

对于量程比较大的比色杯,其加样量应相应增多,检测样本量则对应减少;对于量程比较小的比色杯,其加样量应相应减少,检测样本量则对应增加。

3、生化分析仪检测:

按照下表设置主要参数,如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

波长 340nm
反应温度 37℃
孵育时间 90s
连续监测时间 90s
比色杯光径 1.0cm
系数 3376
待测样品 15μl
ALT检测液(R) 300μl

计算:

分光光度计计算公式:

ALT(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(945/45)=ΔA/min×3376

式中:6220=NADH的吸光度

945=反应液的总体积(μl)

45=待测样品体积(μl)

生化分析仪计算公式:

ALT(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(315/15)=ΔA/min×3376

式中:ΔA/min=测定的340nm吸光度的升高速率

6220=NADH的吸光度

315=反应液的总体积(μl)

15=待测样品体积(μl)

参考范围:

成年健康人血清 ALT:0~40U/L

性能指标:

空白吸光度值≥1.0

空白测定值≤5U/L

线性范围:0~1000U/L

批内 CV<6.0%

批间相对 CV<10%

灵敏度:10U/L

注意事项:

1、抗坏血酸 ≤40mg/dl ,游离胆红素 ≤40mg/dl ,结合胆红素 ≤40mg/dl ,血红蛋白≤500mg/dl对测定结果无影响。

2、如果生化分析仪内无所要求波长的滤光片,应选择接近的滤光片。

3、血清中 ALT活性在室温可以保存 2天,4℃保存 1周,-20℃保存 1个月。

4、严重黄疸、脂血或溶血的血清,可能会引起测定管吸光度增高。有效期:6个月有效。4℃运输,4℃保存;打开包装以后,4℃保存 1个月。

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