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甘油三酯(TG)检测试剂盒(乙酰丙酮微板法)
甘油三酯(TG)检测试剂盒(乙酰丙酮微板法)图片
包装: 100T


半岛bd体育手机客户端 介绍

甘油三酯(Triglyceride,TG)又称三酰甘油或三油酸甘油酯,是三分子长链脂肪酸和一分子甘油形成的脂肪分子,是人体内含量最多的脂类,大部分组织均可以利用甘油三酯分解产物供给能量,同时肝脏、脂肪等组织还可以进行甘油三酯的合成,目前检测甘油三脂的常用方法有酶法和化学法,酶法测定具有简便、快捷、微量且试剂稳定等优点,适用于手工和自动化测定,化学法是使用异丙醇等有机溶剂从血清中抽提出甘油三酯,再经皂化、氧化,由显色反应进行测定,目前最常用的化学法是乙酰丙酮比色法。

甘油三酯(TG)检测试剂盒(乙酰丙酮微板法)其检测原理是组织匀浆液或血清中的甘油三脂被异丙醇提取出来,经氧化铝吸附磷脂等干扰因素,再经皂化后释放出甘油,后者被氧化剂氧化生成甲醛,甲醛与乙酰丙酮在铵离子存在下生成黄色的 3,5-二乙酰-1,4-双氢二甲基吡啶(Hantgsch反应),用酶标仪在 420nm处进行比色测定,与相同处理的标准管对比计算其含量,用于人或动物的血清、血浆、脑脊液等样本中的甘油三脂含量定量测定,本方法所用试剂比较稳定,室温下即可保存半年以上,检测较灵敏,在 0.04~0.8mg/ml(0.045~0.904mmol/L)之间有良好的线性关系。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

半岛bd体育手机客户端 组成:

试剂(A): Glycerol标准(4mg/ml) 1ml 4℃
试剂(B):蛋白沉淀液 15ml RT
试剂(C):氧化铝 50g RT
试剂(D): TG碱性溶液 1.5ml RT
试剂(E): TG氧化剂 5ml 4℃避光
试剂(F): TG显色剂 2.5ml 4℃避光
使用说明书 1份

自备材料:

1、生理盐水、异丙醇

2、离心机、天平

3、离心管、小试管

4、恒温箱

5、酶标仪、96孔板

操作步骤(仅供参考):

1、准备样品:

①血清样品,取 0.1ml血清加入有盖的离心管,向管底吹入 2.4ml异丙醇。

②组织样品,准确称取适量组织样品(质量为 m),按质量(g):生理盐水 (ml)=1:4的比例,加入生理盐水,冰浴条件下手动或机械匀浆,获取匀浆液(体积为 VT),取 0.2ml匀浆液加入有盖的离心管,向管底吹入 2.3ml异丙醇。

③混合后置于 60℃水浴 2min,然后加入 0.5g氧化铝,加盖,快速振摇 2min,3000g离心 5min,取上清液(即抽提液),待用。

2、配制 Glycerol标准工作液:按 Glycerol标准(4mg/ml):蛋白沉淀液=1:49的比例,配制合适量的 Glycerol标准工作液,其浓度为 0.08mg/ml。

3、TG加样:按照下表设置空白孔、对照孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡;如果样品中的 TG含量过高,可减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

加入物质(ml) 空白孔 标准孔 测定孔
蛋白沉淀液 150 100 100
Glycerol标准(0.08mg/ml) 50
抽提液 50
TG碱性溶液 10 10 10
混匀后,置于 60℃恒温箱中孵育 10min。
TG氧化剂 50 50 50
TG显色剂 25 25 25
混匀后,置于 60℃恒温箱中孵育 20min。

4、TG测定:取出 96孔板,冰水冷却,用酶标仪测定 420nm处空白孔、标准孔和测定孔的吸光度(A空白、A标准、A测定)。

计算:
100ml血清中含有的甘油三酯的量:

TG(mg/100ml)=(A测定-A空白)/( A标准-A空白)×0.08×(0.1+2.4)/0.05×100/0.1=(A测定-A空白)/( A标准-A空白)×4000

100g组织中含有的甘油三酯的量:

TG(mg/100g)=(A测定-A空白)/( A标准-A空白)×0.08×(0.2+2.3)/0.05×VT/0.2×100/m=(A测定-A空白)/( A标准-A空白)×2000×VT/m

样品中甘油三酯的浓度:TG(mg/ml)=(A测定-A空白)/( A标准-A空白)×0.08

式中:A测定=测定孔的吸光度
A空白=空白孔的吸光度

A标准=标准孔的吸光度

VT=一定质量组织的匀浆液总体积(ml)

m=实际取用的组织质量(g)

TG浓度换算:1mg/ml=1.13mmol/L

参考范围:

血清 TG正常范围:0.55~1.70mmol/L;
临界阈值:2.30mmol/L;
危险阈值:4.5mmol/L。

注意事项:

1、本法可直接用于检测脑脊液中的 TG含量和尿液中的 TG含量。

2、待测样品如不能及时测定,应置于 2~8℃保存,3天内稳定。

3、该方法的线性范围是 0.04~0.8mg/ml,R2=0.989,0.6mg/ml以内比较准确,超过0.8mg/ml,OD值不稳定,变化较大,值偏低,因此样品浓度超出上述范围应做稀释后再次定量,结果乘以稀释倍数。

4、显色后吸光度会随时间发生变化,故应及时比色,当标本过多时,可置冰箱中逐一比色。

5、皂化、氧化、显色时间和温度对显色结果及最终的吸光度均会造成影响,所以每批次测定都应同时做标准对照。

6、做血浆标本时,应注意抗凝剂的影响,通常使用 EDTA.2K做抗凝胶,浓度为 1mg/ml。

有效期:12个月有效;常温运输,4℃保存。

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