锰过氧化物酶(EC 1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、DTT，多环芳烃等。

锰过氧化物酶在Mn₂+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征吸收峰。

半岛bd体育手机客户端 组成：

半岛bd体育手机客户端 名称	规格	保存条件
试剂一	液体110ml×1瓶	4℃
试剂二	液体2ml×1支	4℃
试剂三	液体4ml×1瓶	4℃，避光
试剂四	液体2ml×1支	4℃

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天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

操作步骤 (仅供参考) ：

酶液提取

1.组织：按照质量(g)：试剂一体积(ml)为1：5～10的比例(建议称取约0.1g，加入1ml试剂一)加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

2.细胞：按照细胞数量(104个)：试剂一体积(ml)为500～1000：1的比例(建议500万细胞加入1ml试剂一)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

3.培养液或其它液体：直接检测。

测定操作：

	对照管	测定管
试剂一(μL)	120	100
试剂二(μL)		20
试剂三(μL)	40	40
样品(μL)	20	20
试剂四(μL)	20	20
充分混匀，于30℃反应10min，于微量石英比色皿/96孔板，测定465nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，△A=A测定管-A对照管

酶活计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/mg prot)=△A÷ε÷d×V反总÷(V样×Cpr)÷T=83×△A÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/g)=△A÷ε÷d×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T=83×△A÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/10⁴cell)=△A÷ε÷d×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T=83×△A÷细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/L)=△A÷ε÷d×V反总÷V样÷T=8.3×10⁴×△A

ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，1ml；V样：反应中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，10min

b.用96孔板测定的计算公式如下

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。 MnP活性(nmol/min/mg prot)=△A÷ε÷d×V反总÷(V样×Cpr)÷T=166×△A÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/g)=△A÷ε÷d×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T=166×△A÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。 MnP活性(nmol/min/10⁴cell)=△A÷ε÷d×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T=166×△A÷细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。 MnP活性(nmol/min/L)=△A÷ε÷d×V反总÷V样÷T=1.66×10⁵×△A

ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，1ml；V样：反应中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，10min。