注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。半岛bd体育手机客户端 货号：BA1170

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，碱性木聚糖酶(BAX)一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。

BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算BAX活力。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

半岛bd体育手机客户端 内容：

试剂名称	规格	保存条件
缓冲液	液体50ml×1瓶	2-8℃
试剂一	液体10ml×1瓶	2-8℃
试剂二	液体15ml×1瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1支	2-8℃

溶液的配制：

1.标准品：10mg木糖，临用前加入667μL蒸馏水配制成100μmol/ml的木糖标准液。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.发酵液：发酵液于8000rpm，4℃，离心15min，取上清，作为待测样本。

2.组织样本：称约0.1g组织，加入1ml缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心15min，取上清蒸馏水稀释10倍待测。

3.酶干粉：称约1mg，加1ml缓冲液溶解，蒸馏水稀释10倍待测。

二、测定步骤

1.可见分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2.2μmol/ml木糖标准品的制备：将标准品用蒸馏水稀释50倍即2μmol/ml的木糖标准溶液备用。

3.样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称(μL)	对照管	测定管	空白管	标准管
样本	200	200	-	-
2μmoL/ml木糖标准品	-	-	-	200
蒸馏水	-	-	200	-
缓冲液	300	300	300	300
试剂一	-	200	200	200
混匀，50℃水浴中反应30min，立即沸水浴中10min灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系)
试剂一	200	-	-	-
试剂二	300	300	300	300
混匀，沸水浴中显色5min(注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系)，冷却后尽快测定各管540nm下的吸光度，分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。

三、BAX活性计算：

1.发酵液BAX活力计算：

酶活定义50℃，pH 9.0条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(U/ml)=C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷T=0.067×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)

C标准：木糖标准溶液浓度，2μmoL/ml；T：反应时间，30min。

2.酶干粉BAX活力计算：酶活定义：50℃，pH9.0条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(U/mg)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W₁÷T=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W₁

10：样本稀释倍数，10倍；C标准：木糖标准溶液浓度，2μmoL/ml；V提取：加入缓冲液体积，1ml；W₁：酶干粉重量，mg；T：反应时间，30min。

3.组织中BAX活力计算：

(1)按样本蛋白浓度计算：

酶活定义：50 ℃，pH 9.0条件下，每mg组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

ACX活力(U/mg prot)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V样品÷(V样品×Cpr)÷T=0.67×?A测定÷?A标准÷Cpr

(2)按样本质量计算：酶活定义：50℃，pH9.0条件下，每克组织每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖

酶的活力单位。

BAX活力(U/g质重)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W₂÷T=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W₂

10：样本稀释倍数，10倍；C标准：木糖标准溶液浓度，2μmoL/ml；V提取：加入缓冲液体积，1ml；W₂：样本鲜重，g；T：反应时间，30min；Cpr：样品蛋白浓度，mg/ml；V样品：加入的样品体积，0.2ml。

注意事项：吸光度变化应该控制在0.01～1之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相

应改变。