几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

半岛bd体育手机客户端 组成：

试剂名称	规格	保存条件
缓冲液	液体8ml×1瓶	4℃
试剂一	液体8ml×1瓶	4℃
试剂二	液体4ml×1瓶	4℃
试剂三	液体4ml×1瓶	4℃
试剂四	液体10ml×1瓶	4℃避光

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品：

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板，甲苯、蒸馏水。

操作步骤：

一、样品处理

新鲜土样风干，过40目筛。

二、测定操作表

	对照管	测定管
土样(g)	0.02
甲苯(μL)	10
混匀，25℃静置15min
缓冲液(μL)	120	40
试剂一(μL)		80
混匀，37℃震荡培养1h，8000rpm，4℃，离心10min，取上清100μL
试剂二(μL)	40	40
混匀，沸水浴7min
试剂三(μL)	40	40
试剂四(μL)	100	100
混匀，37℃水浴30min，取200μL于微量石英比色皿/96孔板中，蒸馏水调零，测定585nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，ΔA=A测定管-A对照管。

三、计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=2.3575x-0.0143，R2=0.9989

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性(mg/d/g)=(ΔA+0.0143)÷2.3575×V反总÷W÷T=15.264×(ΔA+0.0143)÷W

V反总：反应体系总体积，0.3ml；W：样本质量，g；T：反应时间，1/24d

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=1.1788x-0.0143，R2=0.9989

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性(mg/d/g)=(ΔA+0.0143)÷1.1788×V反总÷W÷T=30.528×(ΔA+0.0143)÷W

V反总：反应体系总体积，0.3ml；W：样本质量，g；T：反应时间，1/24d

注意事项:

1.试剂一充分混匀后再使用。

2.反应结束后立即进行比色。

3.试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。