β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖苷酶(C1，EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，C1酶作用于纤维素线状分子的末端，水解β-葡萄糖苷键，每次切下1个纤维二糖分子。

S-C1能够催化对硝基苯纤维二糖苷(PNPC)生成对-硝基苯酚，后者在400nm有特征光吸收。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

半岛bd体育手机客户端 组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体2ml×1瓶(自备)	4℃
试剂二	粉剂×2瓶	4℃
试剂三	液体40ml×1瓶	4℃
试剂四	液体30ml×1瓶	4℃
标准品	液体1ml×1支	4℃

溶液的配制：

1.试剂一：甲苯自备。

2.试剂二：临用前每瓶加入7.5ml试剂三，充分溶解备用，用不完的试剂仍4℃保存。

3.标准品：5mmol/L的对硝基苯酚溶液。临用前用试剂三将标准品稀释50倍得100μmol/L的标准溶液。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、30-50目筛、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

二、测定步骤

1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至400nm，蒸馏水调零。

2.加样表：

试剂名称	测定管	对照管	标准管	空白管
风干土样(g)	0.03	0.03	-	-
试剂一(μL)	15	15	-	-
振荡混匀，使土样润湿，室温放置 15min
试剂二(μL)	120	-	-	-
试剂三(μL)	150	150	-	-
混匀，37℃水浴反应 1h后，立即沸水浴 5min(盖紧，防止水分散失)，流水/冰浴冷却。
试剂二(μL)	-	120	-	-
10000rpm 25℃离心 10min，取上清液
上清液(μL)	100	100	-	-
标准品(μL)	-	-	100	-
蒸馏水(μL)	-	-		100
试剂四(μL)	200	200	200	200

充分混匀，室温静置 2min后，吸取 200μL于微量比色皿/96孔板中测定 400nm处的吸光值 A，分别记为 A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管设一个对照管。

三、S-C1 活力计算

单位的定义：每天每 g土样中产生 1μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-C1活力(U/g土样)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T =0.684×ΔA÷ΔA标准÷W

T：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：2.85×10^-4L；C标准：标准溶液浓度，100μmol/L；W：样本质量，g。

注意事项:

当吸光值大于 1.5时，建议将上清液用试剂三稀释后测定或者减少土样质量测定。

实验实例：

1.取两管 0.03g土样，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A测定管、A对照管。用 96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.444-0.244=0.2，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.413-0.048=0.365，计算酶活得：S-C1活力(U/g土样)=0.684× ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.684×0.2÷0.365÷0.03=12.493 U/g土样。

2.取两管 0.03g林土样，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A测定管、A对照管。用 96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.33-0.195=0.135，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.413-0.048=0.365，计算酶活得：S-C1活力(U/g土样)=0.684×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.684×0.1135÷0.365÷0.03=8.4329 U/g土样。