β-1,3葡萄聚糖(β-1,3-GA)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
半岛bd体育手机客户端 介绍
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下,可诱导细胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。 β-1,3-GA水解昆布多糖,内切β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率,来计算其酶活性。 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 半岛bd体育手机客户端 组成:
溶液的配制: 1.试剂一:临用前加3ml蒸馏水溶解,用不完的试剂4℃保存; 2.标准品:10mg无水葡萄糖,临用前加入1ml蒸馏水溶解,配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用,4℃可保存1周。 需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品: 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 操作步骤: 一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 2.细菌或细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1ml提取液,超声波破菌碎细或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 二、测定步驟 1.分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。 2.标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。 3.样本测定,(在1.5ml EP管中依次加入下列试剂)
充分混匀,沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),540nm处记录各管吸光值A,ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。如果吸光值大于2,可以用提取液对样本稀释后测定(计算公式乘以相应稀释倍数)。 三、β-1,3-GA活性计算 1.标准曲线的建立: 根据标准管吸光度 x(A标准管-A空白管)和浓度(y,mg/ml)建立标准曲线,将ΔA带入公式中计算出样本中产生的还原糖的含量y值(mg/ml)。 2.β-1,3-GA活性计算: (1)按蛋白浓度计算单位的定义:每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)÷T=y÷Cpr (2)按样本质量计算单位的定义:每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/g质量)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)÷T=y÷W (3)按细菌或细胞数量计算单位的定义:每1万个细胞或细菌每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/104cell)=(y×V1)÷(500×V1÷V2)÷T=0.002×y V1:加入反应体系中样本体积,0.1ml;V2:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;T:反应时间,60min=1h;500:细菌或细胞总数,万。
用户评论
半岛bd体育手机客户端 评分
目前评分共0人
半岛bd体育手机客户端 质量
售后服务
易用性
性价比
|
同品牌半岛bd体育手机客户端 :
相关半岛bd体育手机客户端 :
|