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土壤β-木糖苷酶(S-β-XYS)测试盒(可见分光光度法)
土壤β-木糖苷酶(S-β-XYS)测试盒(可见分光光度法)图片
货号: SBXYS-2-Y
包装: 50管/24样


半岛bd体育手机客户端 介绍

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。

测定原理

S-β-XYS催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在 405nm处有特征吸收峰,测定 405nm光吸收增加速率,可计算 S-β-XYS活性。

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天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体 50mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体 2mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体 20mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

约 0.1g鲜土或风干土样,加入 1mL提取液进行冰浴匀浆,室温振荡提取 30min,然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清待测。

测定操作表:

1、分光光度计预热 30min,调节波长至 405nm。

2、操作表


对照管 测定管
样本(μL) 200 200
试剂一(μL)
50
试剂二(μL) 400 350
混匀,45℃水浴 20min
试剂三(μL) 400 400
混匀,静置 5min,405nm处测定吸光值 A,计算 ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

β-木糖苷酶活性

标准曲线:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x为标准品浓度(μmol/mL),y为吸光值ΔA。

酶活定义:每克土样每天催化产生 1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性(μmol/d/g土样)=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=16.33×(ΔA-0.0011)÷W

V样总:加入提取液体积,1mL; V反总:反应总体积,0.6mL;V样:反应中样品体积,0.2mL; W:样品质量,g;T:反应时间,20min=1/72d;

ΔA控制在0.01-2范围内,若ΔA大于2,可适当减小样本量。

标准曲线线性范围为:0.01μmol/mL-0.5μmol/mL

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