半岛bd体育手机客户端 简介

江苑生物的慢病毒包装试剂盒（Lentiviral Packaging Kit）由优化的慢病毒包装辅助质粒混合物（Packaging Mix）、表达eGFP蛋白的对照质粒（eGFP Control）和高效的转染试剂（Transfection Reagent）组成，可以兼容**代和第三代的慢病毒包装质粒。

Lentiviral Mix能够表达病毒包装需要的各种必需成分如：gag基因，编码病毒主要的结构蛋白；pol基因，编码病毒特异性的酶；rev基因，编码调节gag和pol基因表达的调节因子；还含有单纯疱疹病毒来源的VSV-G基因，提供病毒包装所需要的包膜蛋白。江苑生物的慢病毒包装系统产生的慢病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。

本试剂盒具有慢病毒包装时间周期短（一周之内即可获得纯化好的高滴度慢病毒）和病毒滴度高的优势，可应用于针对不同基因和药物靶标的细胞学实验和整体动物实验。非常适合于病毒包装初试者。

半岛bd体育手机客户端 组分

组分名称	储存	半岛bd体育手机客户端 货号/规格
		JY03021	JY03022	JY03023
Packaging Mix	-20℃	150 μL	300 μL	600 μL
eGFP Control	-20℃	7.5 μg	7.5 μg	7.5 μg
Transfection Reagent	4℃	240 μL	480 μL	960 μL

保存条件

冰袋运输。Transfection Reagent 4 ?C保存，长期不使用可-20?C保存。其余组分均于-20℃保存, 避免反复冻融。保质期1年有效。

注意事项

1．废弃的含病毒的培养基中加入84消毒液（1:20左右），浸泡1天后丢弃。接触过病毒的枪头，离心管，培养板等其他物品可用84消毒液稀释液处理，也可以用煮沸处理半小时或常规灭菌（121℃，20 min）。

2．本半岛bd体育手机客户端 仅用于科学研究。

3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

还需准备的其他实验材料

1．表达目的基因的慢病毒载体质粒：在慢病毒包装前，需要先获得感兴趣的目的基因慢病毒载体，该载体可能表达目的基因、shRNA或microRNA等。以无内毒素高纯度的试剂盒提取表达目的基因的慢病毒载体质粒，并将质粒DNA溶于无菌的TE或ddH₂O中，测定其浓度及纯度，保证质粒DNA的A260/A280在1.8-2.0之间。江苑生物提供基因过表达、shRNA/miRNA介导的基因沉默、CRISPR/Cas9介导的基因敲除等服务。

2．慢病毒包装用293T细胞株：良好的细胞状态对病毒的包装至关重要，避免细胞培养基有细菌、真菌或支原体的污染，尽量使用传代次数较少的细胞，如果细胞是刚复苏的话，更好传两代之后再包装。

3．细胞培养基，血清和双抗等

4．其他常用实验耗材（如10 cm培养皿，离心管等）

使用说明

以10 cm培养皿为例：

1．293T细胞分盘：转染前，将293T细胞以合适的比例传代到10 cm培养皿中，当细胞长到70%-90%时准备转染。

注：细胞要充分消化，成团细胞影响转染效率。

2．转染前换液：转染前将需要转染的细胞换成新鲜的完全培养基（含有血清和抗生素），10 mL/10 cm皿。注：293T细胞贴壁性不是很好，换液时应小心滴加尽量避免冲起细胞。抗生素和血清不会影响转染效率，也不会在细胞转染后导致细胞毒性。

3．转染：取无菌的离心管，加入750 μL DMEM（不含血清和抗生素），7.5 μg表达目的基因的慢病毒载体质粒（自行提供），和15 μL Packaging Mix，用枪轻轻吹打混匀；再加入25 μL Transfection Reagent，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。将混合液均匀滴加到提前换液的培养皿中，轻轻混匀，置于培养箱中培养，后续无需在数小时后更换培养液。

DMEM	750 μL
表达目的基因慢病毒载体质粒 (或者eGFP Control，作为对照)	7.5 μg (eGFP Control 7.5 μg)
Packaging Mix	15 μL
Transfection Reagent	25 μL

注：上述混合液室温存放6 h内稳定。

4．病毒收集：转染36 h左右后，吸取上清至新的离心管中，4℃保存。另外添加10 mL新鲜的完全培养基到细胞中，注意不要冲起细胞。再次大约36 h后，收取上清至同一个离心管中。将两次收集的上清用0.45 μm滤器过滤后转移到新的离心管中（若没有0.45 μm滤器，将上清3000 rpm，4 ℃离心5 min，弃沉淀亦可）。此时上清液中的病毒颗粒可以直接检测滴度或者感染目的细胞，如果对病毒的滴度及纯度有较高要求，可对上清液进行浓缩与纯化。

注：如果使用滤器过滤，只能使用低蛋白结合力的纤维素醋酸酯或聚醚砜（PES）膜，不能用硝酸纤维素膜（NC）。

5．（可选）慢病毒浓缩：可以使用江苑生物的慢病毒浓缩试剂盒（JY03011）进行慢病毒浓缩，效率更高。同时，也可以自行配制PEG-8000慢病毒浓缩液浓缩慢病毒。

6．病毒分装与保存：将病毒上清或浓缩后的病毒分装，保存于-80℃。

注：病毒液一定要分装，切忌反复冻融，冻融一次病毒滴度将降低20-60%。

图1 江苑生物与**公司慢病毒包装试剂盒包装效率比较