| 细胞基本属性 |
| 细胞名称 |
A-704人肾癌细胞 |
| 细胞别称 |
A-704；人肾癌细胞 |
| 种属来源 |
人 |
| 组织来源 |
肾癌 |
| 生长特性 |
贴壁生长 |
| 细胞形态 |
上皮细胞样 |
| 细胞代数 |
10代以内 |
| 背景介绍 |
A-704细胞系来源于78岁男性肾癌患zhe，D.J. Giard建系，该细胞适宜做转染宿主。细胞在免疫缺陷小鼠上不能形成移植瘤，但是可以在半固体培养基中形成克隆。 |
| 细胞规格 |
1x106cells/T25或1mL冻存管 |
| 支原体检测 |
无 |
| 培养基 |
MEM+10% FBS+1%双抗 |
| 培养条件 |
气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
| 冻存条件 |
无血清冻存液，液氮储存 |
| 细胞货期 |
2周左右 |
| 运输方式 |
复苏发货(T25瓶免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) 顺丰快递 |
| 供应限制 |
仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的医疗半岛bd体育手机客户端 使用 |
| 细胞培养操作 |
| 收货方式 |
T25瓶 |
冻存管 |
| 收货处理 |
观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态 |
收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏 |
| 传代密度 |
细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 |
第2天换液并检查细胞密度 |
| 传代比例 |
初次传代建议1：2传代
1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶 |
| 传代方法 |
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 |
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜)。第2天换液并检查细胞密度。 |
| 注意事项 |
1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。 |
1.收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存；
2.为保证细胞的高存活率，收到半岛bd体育手机客户端 后，请立即解冻复苏细胞。 |
| 到货须知 |
1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照)，记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
3.由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 |
| 备注：客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术服务电话。 |
| 细胞冻存操作 |
| 冻存液配方 |
无血清冻存液，液氮储存 |
| 细胞密度 |
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 |
| 冻存方法 |
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106～1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 注意事项 |
冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
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