细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

半岛bd体育手机客户端 名称	半岛bd体育手机客户端 简称	货号
P3X63Ag8.653(骨髓瘤细胞)	P3X63Ag8.653	GOY-X6416

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

MFAP5(Microfibrillar-associated protein 5) ELISA KitRat Trpv1(Transient receptor potential cation channel subfamily V member 1) ELISA KitO-叔丁基-L-酪氨酸组织基质金属蛋白酶（MMP-9）活性荧光定量检测试剂盒

WDR45 ELISA KitRat Rrm2(Ribonucleoside-diphosphate reductase subunit M2) ELISA KitO-叔丁基-L-酪氨酸体液基质金属蛋白酶（MMP-9）活性荧光定量检测试剂盒

WDR46 ELISA KitRat GT(Gastrin) ELISA Kit油胺细胞基质金属蛋白酶（MMP-9）活性比色法定量检测试剂盒

ZP3(Zona pellucida sperm-binding protein 3) ELISA KitRat Dio1(Type I iodothyronine deiodinase) ELISA Kit油胺组织基质金属蛋白酶（MMP-9）活性比色法定量检测试剂盒

WAPL/WAPAL ELISA KitRat Dio3(Type III iodothyronine deiodinase) ELISA Kit(2R,3R)-(-)-1,4-双(二苯基膦基)-2,3-O-异亚丙基-2,3-丁二醇体液基质金属蛋白酶（MMP-9）活性比色法定量检测试剂盒

VWA2 ELISA KitRat Plg(Plasminogen) ELISA Kit(2R,3R)-(-)-1,4-双(二苯基膦基)-2,3-O-异亚丙基-2,3-丁二醇细胞基质金属蛋白酶（MMP-10）活性荧光定量检测试剂盒

WDR16 ELISA KitRat Fabp3(Fatty acid-binding protein, heart) ELISA Kit多肽试剂TCTU组织基质金属蛋白酶（MMP-10）活性荧光定量检测试剂盒

WDFY3 ELISA KitRat Foxc2(Forkhead box protein C2) ELISA Kit多肽试剂TCTU体液基质金属蛋白酶（MMP-10）活性荧光定量检测试剂盒

P3X63Ag8.653(骨髓瘤细胞)PROZ(Vitamin K-dependent protein Z) ELISA KitBlood Group Antigen Precursor 血型抗原前体蛋白抗体3-碘吡咯烷-1-羧酸叔丁酯2，6-二酚进口/国产RAB3A ras癌因家族Rab3a抗体含量：检查

MTHFD1 ELISA KitBlood Group Kell Antigen/CD238 凯尔血型糖蛋白CD238抗体2,4,6-三溴苯酚环戊嗪进口/国产Rab3A+Rab3B+Rab3C+Rab3D ras癌因家族Rab3A--Rab3D抗体含量：含量测定

MTHFD2(Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2) ELISA KitBlood Group Lewis a 血型Lewis a抗体2,4,6-三溴苯酚多巴进口/国产RBP4 视黄醇结合蛋白4抗体含量：含量测定

CDK5(Cyclin-dependent kinase 5) ELISA KitDARC/CD234 Duffy血型趋化因子受体抗体牛磺猪去氧胆酸芬那酸进口/国产REG1A 胰岛细胞再生因子ICRF抗体含量：UV法溶出度检查

MTHFD1L ELISA KitGalactosidase alpha α-半乳糖苷酶抗体2,4,6-三甲基苯胺硝唑进口/国产Renin /血管紧张形成酶Ren1抗体含量：含量测定

MTHFS ELISA KitAnkyrin erythroid 红细胞蛋白Ank1抗体2,4,6-三甲基苯胺联双酯进口/国产RSPO1 分泌性蛋白RSPO1抗体含量：含量测定

MTHFD1L ELISA KitPPM1F 钙调蛋白依赖性蛋白激酶磷酸酶抗体氟硼酸螺内酯进口/国产SERPIN A11 丝氨酸蛋白酶抑制剂A11抗体含量：检查

MTHFS ELISA KitRIP3 受体结合丝氨酸苏氨酸激酶3抗体反式,反式-金合欢醇化进口/国产SERPING1/C1 Inactivator 酯酶抑制蛋白C1IN抗体含量：含量测定