细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

半岛bd体育手机客户端 名称	半岛bd体育手机客户端 简称	货号
SMMC-7721(肝癌细胞)	SMMC-7721	GOY-X6356

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

CRIP1 (Cysteine-rich protein 1) ELISA KITPorcine cTnT/TNNT2(Troponin T Type 2, Cardiac) ELISA Kit2-硝基苯甲醛细菌过氧化氢（HYDROGEN PEROXIDE）活性比色法定量检测试剂盒

CUEDC1 (CUE domain-containing protein 1) ELISA KITPorcine CTSK(Cathepsin K) ELISA Kit2-硝基苯甲醛植物过氧化氢（HYDROGEN PEROXIDE）活性比色法定量检测试剂盒

CRISPLD1 (Cysteine-rich secretory protein LCCL domain-containing 1) ELISA KITPorcine CXCL16(Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16) ELISA Kit去甲斑蝥素细胞过氧化氢（HYDROGEN PEROXIDE）活性化学发光法定量检测试剂盒

CPXCR1 (CPX chromosomal region candidate gene 1 protein) ELISA KITPorcine Cys-C(Cystatin C) ELISA Kit4-硝基苯基硼酸组织过氧化氢（HYDROGEN PEROXIDE）活性化学发光法定量检测试剂盒

CDRT4 (CMT1A duplicated region transcript 4 protein homolog) ELISA KITPorcine DAO(Diamine Oxidase) ELISA Kit4-硝基苯基硼酸血液过氧化氢（HYDROGEN PEROXIDE）活性化学发光法定量检测试剂盒

CFDP1 (Craniofacial development protein 1) ELISA KITPorcine EPO(Erythropoietin) ELISA Kit4-硝基苯基硼酸体液过氧化氢（HYDROGEN PEROXIDE）活性化学发光法定量检测试剂盒

CRAMP1 (Protein cramped-like) ELISA KITPorcine ET-1(Endothelin 1) ELISA Kit4-硝基苯基硼酸细胞过氧化氢（HYDROGEN PEROXIDE）活性荧光定量检测试剂盒

CEP85 (Centrosomal protein of 85 kDa) ELISA KITPorcine F1+2(Prothrombin Fragment 1+2) ELISA KitN-苯基马来酰亚胺组织过氧化氢（HYDROGEN PEROXIDE）活性荧光定量检测试剂盒

SMMC-7721(肝癌细胞)PHLDA2 ELISA KitSERBP1 纤溶酶原激活物抑制剂1 RNA结合蛋白抗体1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯芹菜进口/国产plant lectin B4/IB4 植物凝集IB4含量：HPLC≥98%

IFITM3(Interferon-induced transmembrane protein 3) ELISA KitSFR19 剪接因子，精氨酸/丝氨酸丰富19氘代三氟乙酸-d青藤进口/国产SNX1/Sorting nexin1 分选连接蛋白1抗体含量：HPLC≥98%

PIAS1 ELISA KitSOX11 转录因子SOX-11蛋白抗体氘代三氟乙酸-d齐墩果酸进口/国产ERG25 固醇羟化酶单加酶1抗体含量：滴定法≥98%

PIAS2 ELISA KitSVH/ARMC10 肝癌蛋白剪接变异体蛋白抗体原戊酸三甲酯七叶皂苷钠进口/国产phospho-c-Abl(Tyr283) 酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体含量：HPLC≥98%

PIAS3 ELISA KitTHRSP 甲状腺激素反应蛋白抗体原戊酸三甲酯木糖醇进口/国产Cytosine deaminase 胞嘧啶脱氨酶抗体含量：HPLC≥98%

PIAS4 ELISA KitTIMM17A 线粒体内膜转位酶抗体2-氰基-5-三氟甲基吡啶盐酸育亨宾进口/国产SQSTM1/p62 泛结合蛋白P62抗体含量：HPLC≥98%

PHLDA1 ELISA KitTMEM49 跨膜蛋白49抗体2-氰基-5-三氟甲基吡啶烟进口/国产NFAT4 核因子活化T细胞胞浆蛋白3抗体含量：HPLC≥98%

PHLPP ELISA KitTMS1/ASC 凋亡相关斑点样蛋白ASC抗体β-半乳糖苷酶（来源于大肠杆菌）金雀花(野靛)进口/国产Exportin 1/CRM1 染色体区域稳定蛋白/核输出蛋白1/染色体区域稳定必需蛋白抗体含量：HPLC≥98%