本半岛bd体育手机客户端 可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取Total RNA。样品在RNAiso^TMPlus中能够充分被裂解，在加入氯仿离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层(下层)，RNA分布在上清层中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到Total RNA。

半岛bd体育手机客户端 组分

试剂盒之外所需准备试剂
◆ 氯仿
◆ 异丙醇
◆ 75%乙醇(DEPC处理水配制)
◆ RNase-free水(制备方法：使用RNase-free的玻璃瓶，向超纯水中加入DEPC至终浓度0. 1%(v/v)，过夜搅拌后，高温高压灭菌。)

保存和运输
1. 可以在室温下保存，建议在2-8℃下避光保存，效果更佳。
2. 可以在常温下运输。

实验操作
1. TRAzol的使用量情况如下。

2. 实验样品的研磨和匀浆。
A. 贴壁培养细胞
① 倒出培养液，用1×PBS清洗一次。
② 每10 cm²生长的培养细胞中加入1 ml的TRAzol，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落(对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥离细胞)。
③ 将内含细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。
④ 室温静置5分钟。
B. 悬浮培养细胞
① 将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000 g 4℃离心2分钟，弃上清。
② 向每10⁷个细胞中加入l～2 ml的TRIzol。
③ 用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。
④ 室温静置5分钟。
C. 动物组织、植物材料样品
① 将超低温冻结的RNA提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状(无明显的可见颗粒，如果没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量)。
② 对于普通的RNA提取样品，可以向研钵中加入适量的TRAzol，将研磨成粉末状的样品完全覆盖，然后室温静置，直至样品完全融化，再用研杵继续研磨至裂解液呈透明状。
对于特殊样品，如肝、脾、骨及软骨等，可以将研磨成粉末状的样品加入到含有适量的TRAzol的匀浆管中，把匀浆管置于冰浴中进行匀浆，直至匀浆液呈无颗粒透明状。
③ 将匀浆液转移至离心管中，室温静置5分钟。
④ 12,000 g 4℃离心5分钟。
⑤ 小心吸取上清液，移入新的离心管中(切勿吸取沉淀)。
3. Total RNA的提取。
① 向上述步骤2的匀浆裂解液中加入氯仿(TRAzol的1/5体积量)，盖紧离心管盖，用力振荡(氯仿沸点低、易挥发，振荡时应小心离心管盖突然弹开)。待充分乳化溶液呈乳白状(无分相现象)后，再室温静置5分钟。
② 12,000 g 4℃离心15分钟。
③ 从离心机中小心取出离心管，此时匀浆液分为三层，即：无色的上清液、中间的白色蛋白层及带有颜色的下层有机相。吸取上清液转移至另一新的离心管中(切忌吸出白色中间层)。
④ 向上清中加入等体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀后，在15～30℃下静置10分钟。
⑤ 12,000 g 4℃离心10分钟。一般在离心后，试管底部会出现沉淀。
4. RNA沉淀的清洗。
小心弃去上清，缓慢地沿离心管壁加入75％的乙醇l ml(切勿触及沉淀)，轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁，12,000 g 4℃离心5分钟后小心弃去乙醇(为了更好地控制RNA中的盐离子含量，应尽量除净乙醇)。
5. RNA的溶解。
室温干燥沉淀2～5分钟(不可以离心或加热干燥，否则RNA将会很难溶解，有关RNA溶解可以参考Troubleshooting中的相关说明)，加入适量的RNase-free水溶解沉淀，必要时可用移液枪轻轻吹打沉淀，待RNA沉淀完全溶解后于-80℃保存。