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HS Mix
HS Mix图片
品牌:东盛
产地:广州


包装与价格:
订货号纯度规格包装价格(元)
P208140次,50 μl体系/次1 ml-
P2082200次,50 μl体系/次1 ml×5-
半岛bd体育手机客户端 名称
HS Taq Mix
HS Mix 浓缩高特异性PCR预混和溶液
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 组分

 P2011
 2×HSTM Mix 1ml 1支
 超纯水 1ml 1支
 P2012
 2×HSTM Mix 1ml 1支×5
 超纯水 1ml 1支×5

注: 本半岛bd体育手机客户端 分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的半岛bd体育手机客户端 ,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类半岛bd体育手机客户端 的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。
 
保存条件
    -20℃保存2年。
    请勿保存于-70℃,防止反复冻融导致酶活降低。
 
半岛bd体育手机客户端 说明
    HSTM Mix是2×浓缩的高特异性PCR预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)。HSTM Mix的反应体系经特殊优化,减少引物二聚体的形成,显著提高PCR扩增的特异性。同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3'-dA突出端。
    Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为0.9-1.2 kb/ min(70-75 ℃)。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。
 
半岛bd体育手机客户端 特点
    高特异性
    使用方便:仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
    快速、高效:减少加样步骤,节约时间。
    可重复:降低污染和加样错误风险
 
半岛bd体育手机客户端 用途
    高特异性PCR检测
    高通量PCR检测
    高重复性PCR检测
    制备TA克隆用的PCR产物
 
活性定义
    一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
 
质量控制
    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,扩增活性无明显改变。
 
2×HS Mix的组分
  50 mM KCl
  20 mM Tris-Cl
  3 mM MgSO4
  400 mM dNTP混合物
  0.1 U/μlTaq DNA聚合酶
  溴酚蓝等
 
应用举例
注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。
 
以λDNA为模板,扩增1kb片段。

 λ DNA(2.5 ng/μl) 1μl
 Primer 1(10μM ) 2μl
 Primer 2(10μM) 2μl
 2×HSTM TaqMix 25μl
 dd H2O 补足至50μl

 
反应条件

 95℃ 3 min
 95℃ 30 sec
 55~68℃ 30 sec  30 Cycles
 72℃ 1 min
 72℃ 10 min


备注:
    1、Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物的3'末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷。
    2、建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。
    3、模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)

 人类基因组DNA 0.1 μg ---1 μg
 λDNA 0.5 ng---5 ng
 质粒DNA 0.1ng-10 ng
 大肠杆菌DNA 10 ng-100 ng

    4、HSTM Mix的扩增产物经纯化后可直接用于测序反应。
 
Q&A
问:为什么HSTM Mix的特异性会高于PCR Mix?
答:这是由于东盛对HSTM Mix反应缓冲液中的离子浓度等因素进行了优化。PCR引物在不同的离子浓度条件,与模板的结合能力差异显著。经过优化,HSTM Mix能够显著提高引物与模板结合的严谨性,从而提高PCR扩增的特异性,降低背景。在少数情况下,HSTM Mix的扩增效率可能低于PCR Mix。
 
问:HSTM Mix的扩增产物能否直接进行TA克隆?
答:直接进行TA克隆。

 

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