半岛bd体育手机客户端 组分

注： 本半岛bd体育手机客户端 分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的半岛bd体育手机客户端 ，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类半岛bd体育手机客户端 的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。
 
保存条件
    -20℃保存2年。
    请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。
 
半岛bd体育手机客户端 说明
    HS^TM Mix是2×浓缩的高特异性PCR预混和溶液，含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染(加样次数减少)。HS^TM Mix的反应体系经特殊优化，减少引物二聚体的形成，显著提高PCR扩增的特异性。同时，由于体系内含有增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3'-dA突出端。
    Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为0.9-1.2 kb/ min(70-75 ℃)。该酶具有5'→3'聚合酶活性，无3'→5'外切酶活性。
 
半岛bd体育手机客户端 特点
    高特异性
    使用方便：仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
    快速、高效：减少加样步骤，节约时间。
    可重复：降低污染和加样错误风险
 
半岛bd体育手机客户端 用途
    高特异性PCR检测
    高通量PCR检测
    高重复性PCR检测
    制备TA克隆用的PCR产物
 
活性定义
    一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
 
质量控制
    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，扩增活性无明显改变。
 
2×HS Mix的组分
  50 mM KCl
  20 mM Tris-Cl
  3 mM MgSO₄
  400 mM dNTP混合物
  0.1 U/μlTaq DNA聚合酶
  溴酚蓝等
 
应用举例
注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
 
以λDNA为模板，扩增1kb片段。

 
反应条件

备注：
    1、Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物的3'末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷。
    2、建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。
    3、模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)

    4、HS^TM Mix的扩增产物经纯化后可直接用于测序反应。
 
Q&A
问：为什么HS^TM Mix的特异性会高于PCR Mix？
答：这是由于东盛对HS^TM Mix反应缓冲液中的离子浓度等因素进行了优化。PCR引物在不同的离子浓度条件，与模板的结合能力差异显著。经过优化，HS^TM Mix能够显著提高引物与模板结合的严谨性，从而提高PCR扩增的特异性，降低背景。在少数情况下，HS^TM Mix的扩增效率可能低于PCR Mix。
 
问：HS^TM Mix的扩增产物能否直接进行TA克隆？
答：直接进行TA克隆。