半岛bd体育手机客户端 组分

P2021
2×PCR PfuMix	1ml	1支
超纯水	1ml	1支
P2022
2×PCR PfuMix	1ml	1支×5
超纯水	1ml	1支×5

注：本半岛bd体育手机客户端 分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的半岛bd体育手机客户端 ，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类半岛bd体育手机客户端 的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

保存条件
-20℃保存2年。
请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。

半岛bd体育手机客户端 说明
Pfu Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液，含有Pfu DNA聚合酶、dNTP混合物、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染(加样次数减少)。同时，由于体系内含有优化剂与增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有平末端。
Pfu DNA聚合酶是极端嗜热性细菌Pyrococcus furiosus来源的高度热稳定DNA聚合酶，分子量为90 KD。其保真性是普通Taq DNA聚合酶的10倍左右。扩增片段的长度可达2 kb(简单模板)。延伸速度为0.2-0.4 kb/ min(70-75℃)。该酶具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性。

半岛bd体育手机客户端 特点
使用方便：仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
快速、高效：减少加样步骤，节约时间。
可重复：降低污染和加样错误风险。

半岛bd体育手机客户端 用途
高保真PCR扩增
高通量、高重复性高保真PCR扩增
高重复性高保真PCR扩增
制备基因克隆或蛋白表达用的PCR产物
位点特异性突变

活性定义
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，扩增活性无明显改变。

2×PCR Pfu Mix的组分
100 mM KCl
200 mM Tris-Cl
20 mM MgSO₄
100 mM (NH₄)₂SO₄
400 mM dNTP混合物
0.1 U/μl Pfu DNA聚合酶等

应用举例
注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。

λ DNA(2.5 ng/μl)	1 μl
Primer 1(10 μM )	2 μl
Primer 2(10 μM)	2 μl
2×PCR PfuTaqMix	25 μl
dd H2O	补足至50 μl

反应条件

95℃	1~3 min
95℃	30 sec
55~68℃	30 sec 30 Cycles
72℃	2~8 min
72℃	7 min

备注：
1、建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。
2、模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)

人类基因组DNA	0.1 – 1 μg
λDNA	0.5 – 5 ng
质粒DNA	0.1 – 10 ng
大肠杆菌DNA	10 – 100 ng

Q&A
问：Pfu Mix的反应体系与普通Pfu DNA聚合酶的反应体系有何不同？
答：Pfu Mix的反应体系中除Pfu DNA聚合酶、dNTP混合物、Mg²⁺等常规组分外，还包含适当比例的PCR Enhancer与稳定剂。而且，反应体系中的离子种类与浓度也有所区别。

问：为什么Pfu Mix的灵敏度与扩增效率会高于普通Pfu DNA聚合酶？
答：这是由于东盛对PfuMix反应缓冲液中的成分与浓度进行了优化。我们在Pfu Mix反应缓冲液中添加了适当比例的PCR Enhancer，提高了聚合酶的热稳定性，显著降低DNA二级结构对于PCR扩增的影响。同时，对PfuMix反应缓冲液中的离子浓度与比例进行优化，使得聚合酶处于最适活性状态，从而获得了***扩增效率。

问：Pfu Mix的保真性与扩增片段长度是多少？
答：Pfu Mix的保真性是普通Taq DNA聚合酶的10倍。对于简单模板，Pfu Mix可扩增2 kb以下的片段。

问：Pfu Mix的扩增产物能否直接进行TA克隆？
答：不可以直接进行TA克隆。建议对PCR产物纯化后，加A再进行TA克隆。