产品组分９br/>
| P2071b |
|
|
| 2×FSTMMix T |
1ml |
1?/span> |
| Extraction Solution |
10ml |
1瓵/span> |
| Neutralization Solution |
1ml |
1?/span> |
| 超纯氳/span> |
1ml |
1?/span> |
| P2072b |
|
|
| 2×FSTMMix T |
1ml |
1支? |
| Extraction Solution |
40ml |
1瓵/span> |
| Neutralization Solution |
5ml |
1瓵/span> |
| 超纯氳/span> |
1ml |
1支? |
注： 本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中
包含溴酚蓝的包装、br/>
保存条件
-20℃保?年、br/>请勿保存?70℃，防止反复冻融导致酶活降低、br/>
产品说明
FSTMMix Direct for tissue是适合组织样本扩增?×浓缩快速高效PCR预混和溶液，含有FSTMTaq DNA聚合酶、dNTP混合物、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增体系中加入简单处理后的样本处理液和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染（加样次数减少）。本产品不用进行繁琐费时费钱的DNA提取，最大限度减少实验误差和交叉污染；结果可靠，经检验与DNA扩增产物无异、br/> 含溴酚蓝染料的PCR产物可直接电泳、br/> FSTMTaq DNA 聚合 是东盛根据蛋白工程原理，以Taq DNA 聚合酶为基础研发的新型DNA聚合酶。本产品具备类似KOD酶快速扩增能力，延伸速度可达3 kb/min，是普通Taq DNA 聚合酶的3倍，可缩短一半以上的PCR扩增时间。同时具备普通Taq DNA 聚合酶扩增效率高、适应性广等优点、br/>
产品特点
高特异性、br/> 样品用量节省
使用方便：无需繁琐的DNA提取过程，仅需简单处理样本即可进行PCR扩增、br/> 快速、高效：减少加样步骤，节约时间、br/> 可重复：降低污染和加样错误风?br/>
产品用逓br/>高特异性组织、细胞样本PCR检浊br/> 高通量组织、细胞样本PCR检浊br/> 高重复性组织、细胞样本PCR检浊br/> 制备TA克隆用的PCR产物
活性定么br/>一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃?0 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量、br/>
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，扩增活性无明显改变、br/>
应用举例
注：以下反应举例?5 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定**反应条件、/span>
| 处理液上渄/span> |
0.5μl |
| 引物1 ?0 μM（/span> |
1 μl |
| 引物2 ?0 μM（/span> |
1 μl |
| 2×FSTM Mix B |
12.5 μl |
| 超纯氳/span> |
补足?5 μl |
PCR反应条件
多数模板的快速扩增条仵/strong>
| 94ℂ/span> |
4 min |
| 94ℂ/span> |
30 sec |
| 55~68ℂ/span> |
30 sec 30 Cycles |
| 72ℂ/span> |
20 sec |
| 72ℂ/span> |
2 min |
1kb简单模板的快速扩增条仵/strong>
| 95ℂ/span> |
3 min |
| 95ℂ/span> |
15 sec |
| 55~68ℂ/span> |
15 sec 30 Cycles |
| 72ℂ/span> |
20 sec |
| 72ℂ/span> |
2 min |
注：由于1 kb简单模板的二级结构简单，且长度较短，可同时缩短变性、退火时间至15 s，以实现快速扩增、br/>
注意事项
1 使用本产品时，引物、模板、dNTPs用量跟普通PCR Mix的一样，为实现快速扩增，请尽量选用小体反应体系、br/> 2 退火温度一般为TM-5℃或TM-8℃，稍低的退火温度有利于实现快速扩增、br/> 3 延伸时间视片段长度而定。一般情况，?00 bp目的片段延伸15 s?00 bp-1 kb目的片段延伸20 s；＞1 kb目的片段，延伸时 20s/kb计算，如1.5 kb目的片段延伸30 s? kb目的片段延伸60 s、br/> 4 FSTMTaq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3'末端通常会加上一个多余的脱氧腺嘌呤核苷、br/> 5 建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果、br/> 6 50μl PCR反应体系中模板DNA推荐用量
| 人类基因组DNA |
0.1μg------1μg |
| λDNA |
0.5ng--------5ng |
| 质粒DNA |
0.1ng------10ng |
| 大肠杆菌DNA |
10ng-----100ng |
Q&A
问：使用FSTMMix Direct for tissue扩增时是否需要使用快速PCR扩增仪？
答：不需要，使用普通的PCR扩增仪即可、br/>问：FSTMMixDirect for tissue的使用与普通Taq Mix 有何不同＞br/>答：使用方法与普通PCR Mix 基本相同，只需注意扩增条件中时间适当缩短、br/>问：FSTMMix Direct for tissue扩增产物是否可用于TA克隆＞br/>答：FSTMTaq DNA 聚合 没有3-5外切酶活性，所以PCR产物末端 A，可进行TA克隆、br/>问：FSTM系列与KOD系列产品相比有什么区别？
答：KOD?-5外切酶活性，保真性比较高，但正因为有外切酶活性，容易降解引物及模板，所以其灵敏度及易用性方面不如FSTMTaq。普通检测及基因诊断很少用到KOD酶、/span>
m.cnreagent.com
