半岛bd体育手机客户端 应用——18种氨基酸的分离

色谱条件

流动相：0.1mol/L醋酸钠溶液(pH 6.50):乙腈＝93:7
水:乙腈＝20:80

柱温：40℃

检测器型号：UV(紫外光检测器)

流动相的配制

色谱柱：PolyPakAminoAcid 4.6×250mm×5μm

流动相A：0.1mol/L醋酸钠溶液(pH 6.5):乙腈＝93.0:7.0

配制方法：准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000mL水中，搅拌均匀，使之溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50；准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液930mL和乙腈70mL，混合均匀，抽滤过0.22μm滤膜；

流动相B：水:乙腈＝20.0:80.0

配制方法：准确量取水200mL和乙腈800mL，混合均匀，抽滤过0.22μm滤膜；

衍生化反应

1.对照品溶液浓度值

Name	M.W.	C(μmol/mL)	Name	M.W.	C(μmol/mL)
门冬氨酸	133.10	2.50	胱氨酸	240.3	1.25
谷氨酸	147.13	2.50	氯化铵	53.49	2.50
丝氨酸	105.09	2.50	酪氨酸	181.19	2.50
甘氨酸	75.067	2.50	缬氨酸	117.15	2.50
组氨酸	155.15	2.50	蛋氨酸	149.21	2.50
精氨酸	174.20	2.50	异亮氨酸	131.17	2.50
苏氨酸	119.12	2.50	亮氨酸	131.17	2.50
丙氨酸	89.093	2.50	苯丙氨酸	165.19	2.50
脯氨酸	115.13	2.50	赖氨酸	146.19	2.50

2.供试品溶液制备

精密量取/称取供试品适量，并配制成相应浓度的溶液备用。

3.衍生步骤

1)分别将A、B两种衍生试剂用稀释剂稀释至原来浓度的1/5倍；

2)精密量取上述对照品溶液160μL，置于试管中，加入稀释后的A溶液100μL和稀释后的B溶液100μL，摇匀，室温反应60min；然后加入正己烷溶液400μL旋紧盖子后振摇5～10s，室温静置分层，取下层200μL溶液，加入800μL水混合均匀，再取200μL加入800μL水混合均匀，用孔径为0.22μm有机膜过滤，待分析；

3)供试品的衍生步骤与对照品相同，样品衍生后稀释体积可根据样品中氨基酸含量适当稀释。

(注意：供试品样品前处理采用酸解提取，需要在衍生之前进行酸挥干处理，供试品中酸性强度过大在衍生过程中会发生中和，衍生过程必须在碱性条件下，才能够起到衍生化完全。)