1 实验部分
1.1 半岛游戏平台官网入口网址 配置
LC1620A Plus 高效液相色谱仪泵一台
RI-201H 示差折光检测器1 台，
ERC-3215 在线脱气机一台
AD 适配器一套
GMP 软件一套
SHODEX NH2P- 50 4E 4.6mm*250mm 色谱柱一根
FA2004 电子分析天平(上海舜宇恒平科学半岛游戏平台官网入口网址 有限公司)；
果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品(>97%，国药试剂)；
乙腈(色谱纯，美国Tedia)；
纯净水(杭州娃哈哈)。
1.2 标准品溶液配制
分别精密称取果糖对照品1.0g，葡萄糖对照品0.8g，置同一具塞锥形瓶中，精密加入40% 乙腈20ml，溶解，摇匀，作为果糖、葡萄糖对照品储备液。另精密称取蔗糖对照品0.2g，麦芽糖对照品0.2g，置同一具塞锥形瓶中，精密加人40 %乙腈10ml，溶解，摇勻，作为蔗糖、麦芽糖对照品储备液。分别精密量取果糖、葡萄糖对照品储备液和蔗糖、麦芽糖对照品储备液，加4 0 %乙腈配成不同浓度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖混合对照品溶液。
| 序号 |
混标浓度(mg/ml) |
|||
| 果糖 |
葡萄糖 |
蔗糖 |
麦芽糖 |
|
| 1 | 10 | 8 | 0.5 | 0.5 |
| 2 | 15 | 12 | 1.0 | 1.0 |
| 3 | 20 | 16 | 2.0 | 2.0 |
| 4 | 25 | 20 | 4.0 | 4.0 |
| 5 | 30 | 24 | 6.0 | 6.0 |
1.3 样品前处理
取蜂蜜约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人4 0 %乙腈20ml，溶解，摇匀，滤过，取续滤液，作为样品溶液。
1.4 色谱条件：
色谱柱：Shodex NH2P-50 4E(4.6×250mm)
流动相：乙腈/水=75/25
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：20ul
2 实验结果
2.1 标准曲线
将一系列浓度的标准溶液由低浓度到高浓度进样，以峰面积(纵坐标Y 轴)对标准品浓度(横坐标X 轴，mg/ml)进行线性回归，求算标准曲线，结果如下：
2.2 含量测定
2.2.1 样品中糖含量的测定
按“样品前处理” 操作制备样品，按上述所建立的HPLC 方法，对蜂蜜样品进行了分析。测定结果计算如下：
表1 蜂蜜含量的测定结果
| 项目 | A/果糖 |
A/葡萄糖 |
A/蔗糖 |
A/麦芽糖 |
| 含量mg/ml |
21.1680 |
17.0152 |
0.0864 |
1.3158 |
| 含量(%) |
39.4788 |
38.3485 |
0.1754 |
1.5156 |
药典要求葡萄糖+果糖>60%，果糖/葡萄糖>1，蔗糖和麦芽糖<5%，符合药典要求。
蜂蜜样品的HPLC 谱图
3 结论
使用 LC1620Plus 泵配合 shodex 示差检测器，按药典方法操作，四种糖在Shodex NH2P-50 氨基柱上能得到良好的分离效果，按 3 倍噪声值计算，理论检出限为 0.2mg/ml，符合 2015 版药典的要求。
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